Anticorpo Policlonal de Coelho Anti-Fosfo-PKR/EIF2AK2-T446 para WB, IF/ICC, ELISA - P19525

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do PKR/EIF2AK2

• Proteína quinase serina/treonina dependente de dsRNA induzida por IFN que fosforila EIF2S1/eIF-2-alfa, levando à inibição da tradução global e desempenhando um papel fundamental na resposta imune inata à infecção viral. Referências relacionadas: PMID:18835251 PMID:19189853 PMID:19507191

• Inibe a replicação viral através da resposta integrada ao stress (ISR) convertendo EIF2S1 num inibidor global da tradução e promovendo a tradução de ATF4; exerce ampla atividade antiviral contra vírus de ADN e ARN, incluindo VHC, VHB, vírus do sarampo e HSV-1. Referências relacionadas: PMID:19189853 PMID:21123651 PMID:22948139 PMID:11836380 PMID:19840259

• Fosforila vários substratos, incluindo p53/TP53, PPP2R5A, DHX9, ILF3, IRS1 e a proteína viral US11, regulando assim a transdução de sinais, apoptose, proliferação celular e diferenciação. Referências relacionadas: PMID:11836380 PMID:19229320 PMID:22214662

• Também funciona como uma proteína quinase de tirosina, fosforilando CDK1 em Tyr-4 em resposta a danos no ADN para promover a sua ubiquitinação e degradação proteassómica. Referências relacionadas: PMID:20395957

• Modula múltiplas vias de sinalização: ativa NF-kappa-B através da interação com IKBKB e proteínas da família TRAF, ativa a quinase p38 MAP via MAP2K6 e regula fatores de transcrição (JUN, STAT1/3, IRF1, ATF3) envolvidos na expressão de citocinas pró-inflamatórias e IFN. Referências relacionadas: PMID:22948139 PMID:23084476 PMID:23372823 PMID:10848580 PMID:15121867 PMID:15229216

• Atua como um regulador duplo da via de sinalização da insulina: negativamente através da fosforilação inibitória de IRS1 em Ser-312, e positivamente fosforilando PPP2R5A, que ativa FOXO1 e aumenta a expressão de IRS2. Referências relacionadas: PMID:20685959

• Regula a montagem e ativação dos inflamasomas NLRP3, NLRP1, AIM2 e NLRC4. Referências relacionadas: PMID:22801494

• Predominantemente citoplasmática com localização nuclear e perinuclear; altamente expresso no timo, baço e medula óssea; níveis elevados em carcinomas da mama e do cólon correlacionam com a progressão do tumor; colocaliza-se com GSK3B e TAU no cérebro na doença de Alzheimer.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunogénio é um fosfopeptídeo sintético em torno de Thr446; os inibidores de fosfatases nos tampões de lise são críticos para preservar a fosforilação durante a preparação da amostra.
• Para western blotting, valide a especificidade fosfo-específica comparando sinais de lisados tratados com fosfatase versus não tratados ou usando um controlo de bloqueio com peptídeo não fosforilado.
• Na imunofluorescência, considere as condições de recuperação de antigénio e inclua uma contracoloração nuclear para visualizar a distribuição citoplasmática/perinuclear.
• Ao aplicar ELISA, emparelhe com um anticorpo total PKR para normalizar a abundância de proteínas e avaliar as razões de fosforilação.
• A reatividade cruzada é reportada para humano e rato; verifique o desempenho noutras espécies antes do uso.

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