Anticorpo Monoclonal de Coelho Anti-Fosfo-PLK1-T210 para WB e ELISA - P53350

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da PLK1

• A proteína quinase serina/treonina PLK1, também conhecida como polo-like quinase 1 e STPK13, é uma reguladora mestra de múltiplos eventos durante a mitose, incluindo a maturação do centrossomo, montagem do fuso, transição G2/M, função do cinetocoro, coesão das cromátides irmãs, saída da mitose e citocinese. Referências relacionadas: PMID:11202906, PMID:12207013, PMID:12447691
• No centrossomo, a PLK1 fosforila substratos chave como KIZ, NEDD1 e NINL para promover o recrutamento do complexo em anel da γ-tubulina e a formação do fuso bipolar. Referências relacionadas: PMID:16980960, PMID:19509060, PMID:12852856
• Durante a saída da mitose e a citocinese, a PLK1 cria seus próprios sítios de ligação nas proteínas do fuso central (PRC1, KIF20A/MKLP2) e fosforila ECT2, CEP55 e RACGAP1 para orquestrar a formação do sulco de clivagem. Referências relacionadas: PMID:12939256, PMID:16247472, PMID:17351640, PMID:19468300, PMID:19468302
• Um regulador crítico do ponto de verificação G2/M, a PLK1 ativa a CDK1 ao fosforilar CDC25C, ciclina B1 e o fator de transcrição FOXM1, enquanto inibe simultaneamente os reguladores negativos WEE1 e PKMYT1/MYT1. Referências relacionadas: PMID:11202906, PMID:12447691, PMID:12524548, PMID:19160488
• No cinetocoro, a PLK1 mantém a sinalização do ponto de verificação da montagem do fuso e a coesão das cromátides irmãs ao fosforilar BUB1B/BUBR1, FBXO5/EMI1, STAG2/SA2 e SGO1. Referências relacionadas: PMID:15148369, PMID:15469984, PMID:17376779, PMID:18331714
• Além da mitose, a PLK1 contribui para a recuperação de danos no DNA e o silenciamento do ponto de verificação ao fosforilar MRE11, RAD51, POLQ e RHNO1, e regula negativamente a estabilidade de p53 via sinalização TOPORS. Referências relacionadas: PMID:18615013, PMID:18662541, PMID:37440612, PMID:37674080, PMID:19473992
• A PLK1 se localiza no núcleo, centrossomo, cinetocoro, fuso mitótico e corpo médio durante a divisão celular, e é altamente expressa na placenta e no cólon. É classificada como fosfoproteína e quinase serina/treonina com papéis no ciclo celular e na divisão celular (UniProt KB - P53350).

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• Este anticorpo foi produzido contra um fosfopeptídeo sintético ao redor de Thr210; portanto, ele reconhece especificamente a forma fosforilada da PLK1. Confirme a especificidade do sinal tratando os lisados com λ-fosfatase ou usando mutantes Thr210 não fosforiláveis.
• Para Western blotting, o peso molecular previsto é de ~68 kDa, mas a fosfo-PLK1 mitótica pode apresentar deslocamento de mobilidade. Use lisados de células paradas na mitose (por exemplo, tratamento com nocodazol) como controle positivo, e células em interfase como controle negativo.
• Em aplicações de ELISA, o anticorpo pode servir como reagente de captura ou detecção para quantificar os níveis de fosfo-PLK1 (Thr210). Otimize o tampão de revestimento, a concentração do anticorpo e o substrato de detecção para o seu formato específico de placa.
• A reatividade cruzada foi validada apenas para PLK1 humana. Ao trabalhar com outras espécies, verifique a homologia de sequência ao redor do epítopo de Thr210 e confirme a reatividade experimentalmente.
• Para preservar a integridade do fosfoepítopo, manuseie as amostras com inibidores de fosfatase e evite o armazenamento prolongado de lisados enriquecidos em fosfoproteínas.

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