Anticorpo Policlonal Anti-Fosfo-POLR2A CTD-S2 para WB, IP, ELISA - P24928

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do POLR2A (subunidade RPB1 da RNA polimerase II dirigida por DNA)

• O POLR2A codifica a maior subunidade e a subunidade catalítica da RNA polimerase II (Pol II), uma RNA polimerase dependente de DNA responsável pela síntese de precursores de mRNA e muitos RNAs não codificantes funcionais (PubMed:23748380, PubMed:27193682, PubMed:30190596, PubMed:28108474). Referências relacionadas: PMID:23748380 PMID:27193682 PMID:30190596 PMID:28108474
• Juntamente com a segunda maior subunidade POLR2B, forma o centro ativo da Pol II, adicionando nucleóticos ao RNA nascente e fornecendo prova de leitura através de uma atividade de exonuclease 3'->5' (PubMed:30190596, PubMed:8381534, PubMed:9852112). Referências relacionadas: PMID:30190596 PMID:8381534 PMID:9852112
• O domínio C-terminal único (CTD) consiste em 52 repetições em tandem de heptapeptídeos (YSPTSPS) e serve como uma plataforma dinâmica para a montagem de fatores que regulam o início, alongamento, terminação da transcrição e processamento co-transcricional de mRNA. A fosforilação no Ser5 promove a fuga do promotor, enquanto a fosforilação no Ser2 é crítica para a libertação da pausa e o alongamento produtivo (PubMed:24207025, PubMed:26124092). Referências relacionadas: PMID:24207025 PMID:26124092
• Para além da atividade de RNA polimerase dependente de DNA, o POLR2A possui função de RNA polimerase dependente de RNA, estendendo RNAs não codificantes e participando na replicação viral, por exemplo, com o vírus da hepatite delta.
• As modificações pós-traducionais do POLR2A incluem fosforilação, acetilação, metilação e ubiquitinação, que afinam a sua atividade e interações.
• O POLR2A localiza-se predominantemente no núcleo, mas também pode ser encontrado no citoplasma e associado aos cromossomas, refletindo os seus papéis na transcrição e para além dela.
• O peso molecular calculado é de aproximadamente 217 kDa.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunogénio é um fosfo-peptídeo sintético correspondente ao Ser2 da repetição CTD do POLR2A humano; a especificidade do anticorpo deve ser confirmada usando lisados tratados com fosfatase ou um peptídeo bloqueador não fosforilado.
• Para aplicações de Western blot, inclua inibidores de fosfatase apropriados nos tampões de lise e de amostra para preservar o sinal de fosforilação.
• Ao realizar imunoprecipitação, certifique-se de que a composição do tampão de lise mantém a integridade do epítopo fosforilado; a pré-limpeza dos lisados pode reduzir a ligação inespecífica.
• Para ELISA, a revestimento com o fosfo-peptídeo imunizante e a deteção com este anticorpo podem ser usadas para avaliar a ligação específica ao fosfo; considere a reatividade cruzada com controlos de peptídeo não fosforilado.
• Este anticorpo também pode reconhecer outras proteínas com motivos fosforilados semelhantes; valide no sistema de amostra relevante.

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