Anticorpo Policlonado de Coelho Anti-Fosfo-POLR2A CTD-S5 para WB, IHC-P, ELISA - P24928

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização de POLR2A (RPB1)

• Como a maior subunidade da RNA polimerase II, POLR2A/RPB1 forma o núcleo catalítico responsável pela síntese de RNA dependente de DNA, transcrevendo precursores de mRNA e RNAs não codificantes (PubMed:23748380, PubMed:27193682, PubMed:30190596). Referências relacionadas: PMID:23748380 PMID:27193682 PMID:30190596

• Junto com a subunidade POLR2B/RPB2, forma o centro ativo com o motivo DxDGD que coordena Mg2+ e oferece prova de leitura por exonuclease 3'→5' para garantir a fidelidade da transcrição (PubMed:30190596, PubMed:8381534, PubMed:9852112). Referências relacionadas: PMID:30190596 PMID:8381534 PMID:9852112

• O domínio C-terminal (CTD) é composto por 52 repetições em tandem de heptapeptídeos (YSPTSPS) e sofre fosforilação dinâmica: a fosforilação de Ser5 (alvo deste anticorpo) promove a saída do promotor, enquanto a fosforilação de Ser2 facilita o alongamento e o processamento do mRNA (PubMed:24207025, PubMed:26124092). Referências relacionadas: PMID:24207025 PMID:26124092

• Além de sua função dependente de DNA, POLR2A exibe atividade de RNA polimerase dependente de RNA, contribuindo para o metabolismo de RNAs não codificantes e atuando como replicase para o vírus da hepatite delta.

• Principalmente localizado no núcleo, POLR2A também se transloca para o citoplasma e se associa aos cromossomos mitóticos, refletindo seus papéis regulatórios multifacetados.

• Mutações em POLR2A estão ligadas ao transtorno do neurodesenvolvimento com hipotonia, deficiência intelectual e características faciais típicas (NEDHIB), ressaltando seu papel essencial no desenvolvimento humano.

• Modificações pós-traducionais do CTD, incluindo acetilação e metilação de resíduos de lisina, fornecem uma camada regulatória adicional para a expressão gênica, sendo a acetilação crucial para a ativação de genes imediatos precoces.

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• O imunógeno é um peptídeo sintético projetado para reconhecer especificamente o resíduo de Ser5 fosforilado dentro do contexto da repetição do CTD; a reatividade cruzada com peptídeo não fosforilado ou outros fosfo-epítopos (por exemplo, Ser2, Ser7) deve ser avaliada no sistema de amostra relevante.
• Para análise por Western blot (WB), é esperada uma banda principal em ~217 kDa correspondente a POLR2A de comprimento total; inclua inibidores de fosfatase nos tampões de lise e eletroforese para preservar o fosfo-epítopo.
• Em imuno-histoquímica (IHC-P), métodos de recuperação de antígeno podem afetar a estabilidade do fosfo-epítopo; teste protocolos suaves baseados em citrato ou EDTA e valide com controles fosforilados positivos e negativos apropriados.
• Aplicações em ELISA podem requerir revestimento com peptídeo fosforilado e bloqueio em condições que mantenham a especificidade do anticorpo pelo fosfo-antígeno.
• A reatividade cruzada é relatada para amostras humanas, de camundongo e rato; no entanto, como a sequência da repetição do CTD é altamente conservada, verifique a especificidade em seu organismo modelo específico por alinhamento de sequência, se necessário.

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