Anti-Phospho-POLR2A CTD-S7 Coelho pAb para WB, IHC-P, ELISA, ChIP - P24928

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização de POLR2A

• POLR2A, também conhecido como RPB1 ou POLR2, é a maior subunidade da RNA polimerase II (Pol II), uma RNA polimerase dependente de DNA responsável pela síntese de precursores de mRNA e muitos RNAs não codificantes funcionais.
• Ele forma o núcleo catalítico junto com a segunda maior subunidade POLR2B, usando um motivo DxDGD coordenador de Mg²⁺ para a polimerização de nucleotídeos e uma atividade exonucleásica 3'→5' para correção de leitura. Referências relacionadas: PMID:23748380, PMID:27193682, PMID:30190596, PMID:8381534, PMID:9852112
• O domínio C-terminal (CTD) exclusivo consiste em 52 repetições tandem de heptapeptídeos (YSPTSPS) e serve como plataforma para reguladores transcricionais. A fosforilação em Ser5 facilita a saída do promotor, enquanto a fosforilação em Ser2 é necessária para a liberação da pausa e o alongamento. Referências relacionadas: PMID:24207025, PMID:26124092
• A acetilação de lisinas no CTD ativa genes imediatos precoces induzidos por fatores de crescimento, enquanto a metilação e dimetilação reprimem a expressão dos genes alvo, ajustando finamente a produção transcricional. Referências relacionadas: PMID:24207025, PMID:26124092
• POLR2A se localiza principalmente no núcleo, mas também é detectado no citoplasma e nos cromossomos, o que é consistente com seu papel dinâmico na transcrição.
• Ele atua como uma RNA polimerase dependente de RNA que estende RNAs não codificantes e pode funcionar como replicase para o vírus da hepatite delta.
• Palavras-chave associadas a POLR2A incluem fosfoproteína, acetilação, metilação, ligação a DNA, ligação a metal, transcrição, interação hospedeiro-vírus e variante de doença, refletindo sua regulação complexa.
• Mutações em POLR2A estão ligadas a transtornos do neurodesenvolvimento, como a deficiência intelectual (NEDHIB).

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• Para western blot, use um gel de SDS-PAGE de baixa porcentagem (por exemplo, 6% ou gradiente) e transferência úmida para garantir a transferência eficiente da proteína de 217 kDa.
• Inclua coquetéis de inibidores de fosfatase nos tampões de lise para preservar o sinal de fosforilação de S7; considere usar um peptídeo não fosforilado ou amostra tratada com fosfatase como controle negativo.
• Em IHC-P, otimize as condições de recuperação de antígeno (tampões à base de citrato ou EDTA) e use um sistema de detecção polimérica para amplificar o sinal.
• Para ELISA, use o fosfo-peptídeo como controle positivo e o peptídeo não fosforilado correspondente para confirmar a especificidade.
• Em ChIP, ligue proteínas reticuladas ao DNA e corte a cromatina em fragmentos de 200–500 pb; o anticorpo pode enriquecer a Pol II nos promotores de genes ativamente transcritos.
• Valide o desempenho do anticorpo na espécie e contexto de tecido relevante antes de experimentos em larga escala.

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