Anticorpo Monoclonal de Coelho Anti-Fosfo-Raf1-S259 para WB e ELISA - P04049

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da RAF1

• RAF1 (também conhecida como c-RAF ou Raf-1) é uma serina/treonina-proteína quinase que atua como elo regulatório crítico entre as GTPases Ras ligadas à membrana e a cascata de sinalização MAPK/ERK a jusante, controlando decisões de destino celular como proliferação, diferenciação, apoptose e sobrevivência.
• Após a ativação, RAF1 fosforila e ativa as quinases de dupla especificidade MEK1/2, que por sua vez fosforilam ERK1/2, propagando sinais que regulam a expressão gênica e as respostas celulares.
• RAF1 fosforilada (por exemplo, em Ser-338 e Ser-339) fosforila diretamente a proteína pró-apoptótica BAD, promovendo a sobrevivência celular. Ela também fosforila adenilil ciclases (ADCY2/5/6) e modula a fosfatase PPP1R12A.
• RAF1 influencia múltiplas vias de sinalização: ela pode promover a ativação de NF-κB enquanto inibe efetores como ROCK2 (motilidade), ASK1/MST2 (apoptose) e RB1 (proliferação/angiogênese).
• Sob estímulos apoptóticos, a RAF1 pode translocar para a mitocôndria, onde se liga a BCL2 e desloca BAD, proporcionando um mecanismo anti-apoptótico adicional.
• RAF1 desempenha um papel na migração celular ao regular a sinalização de Rho e é necessária para a cicatrização normal de feridas. Ela também contribui para a transformação oncogênica por meio da repressão transcricional de proteínas de junção apertada como a ocludina (OCLN).
• A proteína está predominantemente localizada no citoplasma e na membrana celular, mas também pode ser encontrada na mitocôndria e no núcleo sob certas condições.
• RAF1 é expressa em vários tecidos; no músculo esquelético, a isoforma 1 é mais abundante que a isoforma 2.

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• O imunógeno é um peptídeo fosforilado sintético centrado na Ser259 da RAF1 humana (P04049). Espera-se que o anticorpo resultante reconheça especificamente RAF1 quando fosforilado na Ser259; confirme a especificidade comparando os sinais entre amostras tratadas e não tratadas com fosfatase.
• Para Western blot (WB), use um extrato proteico de células humanas ou de rato conhecidas por expressarem RAF1. Uma banda de aproximadamente 73 kDa deve ser observada em condições redutoras. Inclua sempre controles positivos e negativos adequados (por exemplo, lisados de células privadas de soro vs. estimulados com fator de crescimento).
• Para ELISA, titule o anticorpo contra o peptídeo fosforilado imunógeno e valide em uma matriz biológica relevante para garantir detecção linear. Considere o pareamento com um anticorpo anti-RAF1 total para normalizar os níveis de fosforilação.
• Como o anticorpo é fornecido em bolsa de gelo, evite ciclos repetidos de congelamento-descongelamento e armazene nas condições recomendadas para preservar a atividade.

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