Anticorpo Policlonal de Coelho Anti-Fosfo-Raf1 (S259) para WB, IP, ELISA - P04049

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da RAF1

• A RAF1 (também conhecida como c-Raf ou Raf-1) é uma quinase de serina/treonina que atua como um elo regulatório crítico entre as GTPases Ras associadas à membrana e a cascata de sinalização MAPK/ERK, governando decisões do destino celular como proliferação, diferenciação, apoptose, sobrevivência e transformação oncogênica.
• Após ativação, a RAF1 inicia uma cascata de quinase ativada por mitógeno (MAPK) através da fosforilação sequencial das quinases de MAPK de dupla especificidade (MAP2K1/MEK1 e MAP2K2/MEK2) e das quinases reguladas por sinal extracelular (MAPK3/ERK1 e MAPK1/ERK2).
• A RAF1 fosforila múltiplos alvos a jusante, incluindo BAD (na Ser-75), adenilil ciclases (ADCY2, ADCY5, ADCY6), PPP1R12A (inibindo a atividade fosfatase) e TNNT2 (troponina T do músculo cardíaco), modulando assim a apoptose, a sinalização de cAMP e a função cardíaca.
• A proteína pode promover a ativação do NF-kB e inibir transdutores de sinal envolvidos na motilidade (ROCK2), apoptose (MAP3K5/ASK1 e STK3/MST2), proliferação e angiogênese (RB1), destacando seus amplos papéis regulatórios.
• A RAF1 tem sido implicada na transformação oncogênica de células epiteliais pela regulação positiva do repressor transcricional SNAI2/SLUG, que regula negativamente a proteína de junção apertada ocludina (OCLN), e restringe a ativação da caspase em resposta à estimulação por Fas, apoptose de macrófagos mediada por patógenos e diferenciação eritroide.
• Subcelularmente, a RAF1 é encontrada no citoplasma, membrana celular, mitocôndria e núcleo, com a translocação para as mitocôndrias permitindo a ligação à BCL2 e o deslocamento de BAD para proteger as células da apoptose.
• A proteína contém um domínio de dedo de zinco, está sujeita a fosforilação (incluindo na Ser259, que este anticorpo reconhece) e desempenha papéis na cicatrização de feridas, sinalização Rho e migração.
• No músculo esquelético, a isoforma 1 é mais abundante que a isoforma 2; a RAF1 está associada a doenças como cardiomiopatia e surdez (CMD1NN).

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunógeno é um peptídeo fosforilado sintético abrangendo a Ser259 da RAF1 humana. Este desenho teoricamente visa o epítopo fosforilado; no entanto, os usuários devem validar a especificidade para fosfo comparando os sinais entre lisados tratados e não tratados com fosfatase em seu sistema experimental.
• Como o anticorpo é produzido em coelho contra um peptídeo humano, a reatividade cruzada com outras espécies não é garantida; valide no sistema de amostra relevante se forem usados modelos não humanos.
• Para Western blot (WB), espera-se uma banda em torno de 73 kDa. Use condições apropriadas de bloqueio e lavagem para minimizar a ligação inespecífica e inclua um controle positivo (por exemplo, lisados de células estimuladas) para confirmar a detecção fosfo-específica.
• Na imunoprecipitação (IP) e ELISA, o anticorpo pode ter o desempenho indicado; considere otimizar as concentrações de anticorpo e as condições do tampão para o seu ensaio específico.
• Evite ciclos repetidos de congelamento e descongelamento; alíquote e armazene a -20°C ou conforme recomendado.

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