Anticorpo Monoclonal de Coelho Anti-Fosfo-Raf1-S621 para WB, ELISA - P04049

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do RAF1 (c-Raf)

• O RAF1 (também conhecido como c-Raf ou Raf-1) é uma serina/treonina proteína quinase que atua como um elo regulatório crítico entre as GTPases Ras associadas à membrana e a cascata MAPK/ERK, funcionando como um interruptor que controla decisões do destino celular, incluindo proliferação, diferenciação, apoptose e sobrevivência.
• A quinase inicia uma cascata de proteína quinase ativada por mitógeno (MAPK) fosforilando sequencialmente as quinases MAPK de especificidade dupla (MAP2K1/MEK1 e MAP2K2/MEK2) e as quinases reguladas por sinal extracelular (MAPK3/ERK1 e MAPK1/ERK2).
• O RAF1 fosforila diversos substratos: BAD (em Ser-75, via PAK1), adenilciclases (ADCY2, ADCY5, ADCY6), PPP1R12A (inibindo a atividade da fosfatase) e TNNT2; também promove a ativação de NF-κB e inibe as quinases ROCK2, ASK1 e MST2.
• A proteína pode proteger as células da apoptose ao translocar para as mitocôndrias, onde se liga ao BCL2 e desloca o BAD; também restringe a ativação de caspases em resposta à estimulação por Fas, apoptose de macrófagos mediada por patógenos e diferenciação eritroide.
• O RAF1 contribui para a transformação oncogênica através da repressão da proteína de junção紧 ocludina (OCLN), induzindo a superexpressão do repressor transcricional SNAI2/SLUG.
• A localização subcelular inclui citoplasma, membrana celular, mitocôndria e núcleo, refletindo seus papéis regulatórios multifacetados.
• A proteína apresenta um domínio dedo de zinco, liga ATP e está sujeita a fosforilação (ex: S621), metilação e splicing alternativo (o isoforma 1 é mais abundante no músculo esquelético).
• Palavras-chave associadas ao RAF1 incluem cardiomiopatia, surdez, variante da doença, proto-oncogene e serina/treonina proteína quinase, indicando seu envolvimento tanto na fisiologia normal quanto na doença.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunógeno é um peptídeo fosforilado sintético; certifique-se de que as amostras sejam processadas com inibidores de fosfatases para preservar o estado de fosforilação durante a lise e o preparo.
• Para Western blotting, espere uma banda em aproximadamente 73 kDa; inclua controles apropriados, como lisatos tratados com fosfatase ou células estimuladas versus não estimuladas para confirmar a especificidade fosfo.
• Como a fosforilação do RAF1 é dinâmica, considere usar um anticorpo total de RAF1 em paralelo para normalizar os sinais e interpretar com precisão as mudanças de ativação.
• Em ELISA, otimize a concentração do antígeno de revestimento e a diluição do anticorpo; uma curva padrão com um peptídeo fosfo conhecido pode auxiliar na quantificação.
• A reatividade cruzada com tecido de rato é relatada; valide o desempenho do anticorpo em seu sistema específico de modelo de rato, pois a intensidade do sinal pode variar entre as amostras.

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