Anticorpo Policlonal de Coelho Anti-Fosfo-Raf1 (Ser621) - P04049

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da RAF1

• A RAF1, também conhecida como c-Raf ou Raf-1, é uma serina/treonina-proteína quinase codificada pelo gene RAF1. Ela funciona como um elo regulador crítico entre as GTPases Ras associadas à membrana e a cascata de sinalização MAPK/ERK, controlando processos celulares chave como proliferação, diferenciação, apoptose e transformação oncogênica.
• A RAF1 ativada fosforila e ativa as quinases de dupla especificidade MAP2K1/MEK1 e MAP2K2/MEK2, que por sua vez fosforilam as quinases reguladas por sinal extracelular MAPK3/ERK1 e MAPK1/ERK2, propagando os sinais a jusante.
• Além da via MAPK canônica, a RAF1 fosforila vários outros substratos, incluindo BAD (na Ser-75), adenilil ciclases (ADCY2, ADCY5, ADCY6), PPP1R12A e TNNT2, ligando-a a diversas funções celulares como a regulação da apoptose e a sinalização de AMPc.
• A RAF1 se localiza no citoplasma, membrana celular, mitocôndria e núcleo. Sua translocação para as mitocôndrias permite a ligação a BCL2 e o deslocamento de BAD, proporcionando um mecanismo antiapoptótico adicional.
• No músculo esquelético, a isoforma 1 da RAF1 é mais abundante que a isoforma 2, sugerindo papéis reguladores específicos por tecido.
• A RAF1 é um proto-oncogene implicado em vários cânceres; sua atividade desregulada promove a transformação oncogênica, em parte pela repressão de proteínas de junção apertada como a ocludina através da upregulação de SNAI2/SLUG.
• A proteína contém um domínio de dedo de zinco e está sujeita a múltiplas modificações pós-traducionais, incluindo a fosforilação, que regulam rigidamente sua atividade quinase e distribuição subcelular.

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• Este anticorpo foi produzido contra um peptídeo fosforilado sintético correspondente à Ser621 da RAF1 humana. Espera-se que ele reconheça especificamente a RAF1 fosforilada nesse resíduo. Para a detecção total de RAF1, um pan-anticorpo pode ser necessário como controle.
• Para Western blot, use protocolos padrão, mas certifique-se de incluir inibidores de fosfatase nos buffers de lise e incubação para preservar a fosforilação. É esperada a detecção de uma banda próximo a 73 kDa em amostras humanas adequadas.
• Para imunoprecipitação, otimize a concentração do anticorpo e o tempo de incubação para o seu sistema experimental. Recomenda-se a pré-limpeza e controles de isotipo adequados.
• Para ELISA, este anticorpo pode ser usado para captura ou detecção; valide a afinidade de ligação e especificidade com controles de peptídeos fosforilados e não fosforilados.
• Sempre valide o anticorpo na sua matriz de amostra específica e nas suas condições experimentais; o desempenho pode variar com o tipo de célula e o status de estimulação.

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