Anticorpo Policlonal de Coelho Anti-Fosfo-RB (Ser780) para WB, IHC-P, ELISA - P06400

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da RB1

• A proteína associada ao retinoblastoma (RB1) é um supressor tumoral e regulador-chave da transição G1/S do ciclo celular. Atua ligando-se a fatores de transcrição E2F, reprimindo a transcrição de genes necessários para a entrada na fase S. Referências relacionadas: PMID:10499802
• A fosforilação da RB1 por quinases dependentes de ciclina (CDKs) leva à dissociação do E2F, ativando assim a transcrição e promovendo a progressão do ciclo celular. Referências relacionadas: PMID:10499802
• A RB1 também facilita a transição G0-G1 após fosforilação pela CDK3/ciclina-C. Referências relacionadas: PMID:15084261
• Envolvida diretamente na formação da heterocromatina, mantendo a estrutura da cromatina e estabilizando a metilação de histonas, recrutando metiltransferases de histonas como a SUV39H1.
• A localização subcelular inclui o núcleo e o citoplasma, consistente com seus papéis na regulação transcricional e no controle do ciclo celular.
• Expressa na retina e em queratinócitos do prepúcio, com ampla distribuição tecidual refletindo sua função fundamental no ciclo celular.
• Modificações pós-traducionais incluem fosforilação, acetilação e metilação, que modulam sua atividade e interações. A interrupção por oncoproteínas virais (ex.: antígeno T grande do SV40, HPV E7) ilustra seu papel central no controle do crescimento.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunógeno é um fosfopeptídeo sintético correspondente aos resíduos ao redor da Ser780 da RB humana. Para confirmar a especificidade para fosfos, inclua lisados tratados com fosfatase ou compita com peptídeo não fosforilado em seu ensaio.
• Para Western blot, o peso molecular previsto é de aproximadamente 106 kDa em condições redutoras. Use controles positivos (ex.: células em ciclo) e negativos (ex.: células privadas de soro ou deficientes em RB) apropriados para verificar a identidade da banda.
• Em IHC-P, as condições de recuperação antigênica (ex.: tampão citrato pH 6.0 ou EDTA pH 9.0) e a diluição do anticorpo devem ser otimizadas por tipo de tecido. A co-coloração com um anticorpo de RB total pode ajudar a avaliar o estado de fosforilação no contexto tecidual.
• Relata-se que o anticorpo tem reatividade cruzada com RB de camundongo e rato; no entanto, recomenda-se validação na espécie e sistema experimental relevantes.
• Para ELISA, considere revestir com peptídeo fosforilado e verificar a especificidade contra o peptídeo não fosforilado.

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