Anticorpo Monoclonal de Coelho Anti-Fosfo-RB1 (S780) para WB, ELISA - P06400

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da RB1

• A proteína associada ao retinoblastoma (RB1) é um supressor de tumor e regulador do ciclo celular fundamental, controlando a transição G1/S e a progressão G0-G1. Sua atividade é governada pelo estado de fosforilação.
  Referências relacionadas: PMID:10499802 PMID:15084261
• A RB1 hipofosforilada liga-se e inibe os fatores de transcrição E2F, bloqueando a transcrição de genes necessários para a entrada na fase S. Ela tanto mascara fisicamente o domínio de transativação do E2F quanto recruta repressores modificadores de cromatina.
  Referências relacionadas: PMID:10499802
• A RB1 contribui diretamente para a formação e manutenção da heterocromatina estabilizando a metilação de histonas, notadamente recrutando SUV39H1 e KMT5B/C para metilar H4K20 e impor heterocromatina constitutiva.
• A proteína também media repressão transcricional através da SMARCA4/BRG1, ancorando complexos de histona desacetilase (HDAC) a promotores como o c-FOS. Em neurônios, essa repressão é aliviada pela desfosforilação da RB1 dependente de cálcio.
• Oncoproteínas virais (antígeno T grande do SV40, E7 do HPV, E1A do adenovírus) têm como alvo a RB1, dissociando o complexo RB1-E2F para impulsionar a entrada da célula hospedeira na fase S.
• Subcelularmente, a RB1 é principalmente nuclear, onde exerce suas funções regulatórias transcricionais, mas também pode se localizar no citoplasma.
• Expressa na retina e em queratinócitos do prepúcio, com expressão adicional em muitos tipos de tecidos.
  Referências relacionadas: PMID:20940255
• Modificações pós-traducionais incluem extensa fosforilação (por exemplo, em S780 por quinases dependentes de ciclina), acetilação e metilação, que coletivamente modulam sua atividade, interações proteicas e estabilidade. Palavras-chave incluem regulador de cromatina, supressor de tumor e interação hospedeiro-vírus.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• Este anticorpo monoclonal de coelho fosfo-específico tem como alvo o sítio de fosforilação S780 na RB1; garanta o estado de fosforilação da amostra tratando as células com estímulos apropriados (por exemplo, estimulação com soro, inibidores de CDK4/6) e sempre inclua inibidores de fosfatase durante a lise para preservar o epítopo.
• Para Western blot, a banda esperada é ~106 kDa. Valide a especificidade usando um controle de bloqueio com peptídeo não fosfo e compare os sinais em lisados tratados com fosfatase versus não tratados.
• No ELISA, considere usar peptídeos sintéticos fosfo e não fosfo como antígenos de revestimento para confirmar a seletividade do estado de fosforilação.
• A reatividade cruzada é relatada para humano e rato; se usar amostras de camundongo, verifique a homologia de sequência ao redor de S780 e realize um experimento piloto.
• Otimize a diluição do anticorpo empiricamente, pois nenhuma concentração de trabalho validada é fornecida, e sempre inclua controles positivos (por exemplo, linhagens de células cancerígenas proliferativas) e negativos (por exemplo, nulo para RB1 ou privado de soro).

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