Anticorpo Monoclonal de Coelho Anti-Fosfo-RPA2-Ser33 para WB, IF-P, IHC-P, ELISA - P15927

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da Subunidade de 32 kDa da Proteína de Replicação A

• RPA2 é a subunidade de 32 kDa do complexo heterotrímero de proteína de replicação A (RPA), que também inclui RPA1 (70 kDa) e RPA3 (14 kDa). Também é conhecida como fator de replicação A proteína 2 (RF-A proteína 2) e RP-A p34.
• O complexo RPA liga-se e estabiliza o DNA de fita simples (ssDNA) durante a replicação do DNA e após o dano ao DNA, impedindo o reemparelhamento e recrutando proteínas-chave para o metabolismo do DNA.
• Na resposta ao dano ao DNA, RPA2 facilita o recrutamento de ATRIP, que ativa a quinase ATR, um regulador mestre da sinalização de pontos de controle.
• RPA2 é essencial para o recrutamento de fatores de reparo do DNA como RAD51, RAD52, XPA e XPG para a cromatina nos locais de dano ao DNA, permitindo a recombinação homóloga e o reparo por excisão de nucleotídeos.
• O complexo também desempenha um papel no reparo por excisão de bases (BER), provavelmente através da interação com UNG, e estimula a atividade de helicase 5'-3' de BRIP1/FANCJ para promover a reinicialização do garfo de replicação. Referências relacionadas: PMID:17596542
• RPA2 localiza-se predominantemente no núcleo e pode ser encontrado em corpos nucleares PML.
• Modificações pós-traducionais, incluindo fosforilação em Ser33, acetilação e ubiquitinação, regulam as funções de RPA2 no reparo e replicação do DNA.
• O splicing alternativo de RPA2 gera múltiplas isoformas, contribuindo para a diversidade funcional.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• Para Western blot (WB), valide a especificidade fosfo-específica comparando sinais entre amostras tratadas e não tratadas ou usando tratamento com fosfatase lambda.
• Em imunofluorescência (IF-P) e imuno-histoquímica (IHC-P), otimize as condições de fixação e permeabilização para preservar o epítopo de fosforilação, pois a fixação excessiva pode mascarar o alvo.
• Ao usar ELISA, considere emparelhar este anticorpo fosfo-específico com um anticorpo total de RPA2 para normalizar o carregamento de proteína e avaliar a estequiometria de fosforilação.
• Embora reaja cruzadamente com RPA2 de camundongo e rato, confirme a homologia da sequência em torno de Ser33 nestas espécies para garantir o reconhecimento consistente.

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