Anticorpo Monoclonal de Coelho Anti-Fosfo-RPA2 (T21) para WB, ELISA - P15927

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do RPA2

• RPA2 (também conhecido como REPA2, RPA32, RP-A p32, RP-A p34) é a subunidade de 32 kDa do complexo heterotrimérico da proteína A de replicação (RPA), a principal proteína de ligação ao DNA fita simples.
• O complexo RPA se liga e estabiliza os intermediários de ssDNA formados durante a replicação do DNA ou após estresse genético, evitando sua reanelamento e recrutando proteínas envolvidas no metabolismo do DNA.
• Na resposta celular ao dano ao DNA, RPA2 é essencial para recrutar o complexo quinase ATRIP-ATR e fatores de reparo como RAD51, RAD52, XPA, XPG e SMARCAL1 para a cromatina.
• RPA2 contribui para o reparo por excisão de nucleotídeos (NER), reparo por excisão de bases (BER) por meio da interação com UNG, e também pode desempenhar um papel na manutenção dos telômeros.
• RPA estimula a atividade helicase 5'-3' de BRIP1/FANCJ, facilitando o reinício da forquilha de replicação e o reparo do DNA. Referências relacionadas: PMID:17596542
• A localização subcelular é predominantemente nuclear, com enriquecimento nos corpos PML.
• As modificações pós-traducionais incluem acetilação, fosforilação e ubiquitinação (ligação isopeptídica, conjugação Ubl), refletindo sua regulação dinâmica.
• O splicing alternativo gera múltiplas isoformas, e ele é identificado como uma fosfoproteína do proteoma de referência.

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• O imunógeno é um fosfopeptídeo sintético ao redor de T21 do RPA2 humano; espera-se que o anticorpo reconheça especificamente a forma fosforilada de T21. Use controles apropriados (por exemplo, peptídeo não fosforilado ou lisados tratados com fosfatase) para confirmar a especificidade.
• Para análise por western blot (WB), o peso molecular previsto de RPA2 é de aproximadamente 29 kDa. Inclua inibidores de fosfatase durante a preparação da amostra para preservar a fosforilação.
• O anticorpo foi aplicado em WB e ELISA. Otimize as diluições e condições para o seu sistema experimental específico.
• A reatividade cruzada é relatada para amostras humanas e de rato; valide o desempenho em outras espécies, se necessário.
• Considere o uso de extratos nucleares ou células com dano ao DNA para aumentar a detecção, dada a localização nuclear de RPA2 e seu papel na resposta ao dano ao DNA.

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