Anticorpo Policlonal Anti-Fosfo-Smad2 (Ser467) para WB, IHC-P, ELISA - Q15796

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do SMAD2

• SMAD2 (membro 2 da família SMAD), também conhecido como JV18-1, MADH2 ou hMAD-2, é um SMAD regulado por receptor (R-SMAD) que funciona como transdutor de sinal intracelular e modulador transcricional a jusante das cinases do receptor tipo 1 de TGF-beta e activina.
• Após a ligação do ligante, SMAD2 se fosforila e forma um complexo com SMAD4. Este complexo transloca para o núcleo, se liga ao elemento TRE nos promotores de genes alvo e ativa a transcrição, regulando assim diversos processos celulares.
• SMAD2 regula positivamente a atividade da quinase PDPK1 ao promover sua dissociação da proteína inibitória 14-3-3 YWHAQ, influenciando assim vias de sinalização a jusante.
• Estudos funcionais sugerem que ele pode atuar como supressor tumoral no carcinoma colorretal. Referências relacionadas: PMID:8752209
• SMAD2 promove a transcrição mediada por TGFB1 de genes de diferenciação odontoblástica em células da papila dentária, destacando um papel na diferenciação tecido-específica.
• A localização subcelular é principalmente citoplasmática na ausência de sinal, mas após a fosforilação ele transloca para o núcleo. A proteína trafega entre o citoplasma e o núcleo de maneira dependente de fosforilação.
• SMAD2 é amplamente expresso, com altos níveis encontrados no músculo esquelético, células endoteliais, coração e placenta, o que é consistente com seu papel na sinalização cardiovascular e do desenvolvimento.
• A proteína sofre múltiplas modificações pós-traducionais, incluindo fosforilação (crítica para a ativação), acetilação e ubiquitinação. Ela também é uma fosfoproteína ligante de zinco com peso molecular de aproximadamente 52,3 kDa.

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• O imunógeno utilizado foi um peptídeo fosforilado sintético ao redor da Ser467 do SMAD2 humano. Para garantir a detecção da forma fosforilada, considere o uso de inibidores de fosfatase durante o preparo da amostra.
• Para Western blot (WB), o peso molecular previsto do SMAD2 é de ~52 kDa. Observe bandas nesse tamanho; bandas adicionais podem representar isoformas ou modificações pós-traducionais.
• Em imuno-histoquímica (IHC-P), otimize as condições de recuperação antigênica, pois anticorpos específicos de fosforilação podem ser sensíveis aos métodos de fixação.
• Para ELISA, o anticorpo pode ser utilizado para detecção específica de fosforilação; o pareamento com um anticorpo anti-SMAD2 total pode permitir a avaliação da estequiometria da fosforilação.
• Valide a especificidade do anticorpo na espécie relevante e no sistema de amostra utilizando controles positivos e negativos adequados (por exemplo, lisados tratados com fosfatase para WB).

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