Anticorpo Policlonal de Coelho Anti-Fosfo-Smad3-T179 para WB, IHC-P, ELISA - P84022

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da SMAD3

• SMAD3 (membro 3 da família SMAD) é uma SMAD regulada por receptor (R-SMAD) e transdutor de sinal intracelular, também conhecida como JV15-2, homólogo MAD 3 (Mad3) e hMAD-3. Ela media respostas transcricionais a jusante das quinases de receptores de TGF-beta e activina.
• Após fosforilação e ativação pelas quinases do receptor tipo 1, a SMAD3 se liga ao elemento TRE nas regiões promotoras de genes responsivos ao TGF-beta e, em complexo com a SMAD4, ativa a transcrição.
• Além disso, a SMAD3 pode formar um complexo SMAD3/SMAD4/JUN/FOS nos sítios AP-1/SMAD para regular a transcrição, integrando sinais de TGF-beta com outras vias.
• A SMAD3 desempenha um papel inibitório na cicatrização de feridas, modulando o crescimento e migração de queratinócitos e a quimiotaxia de monócitos mediada por TGF-beta, e esse efeito é sensível a hormônios.
• Atua como reguladora da condrogênese e osteogênese e inibe a cicatrização precoce de fraturas ósseas.
• A SMAD3 regula positivamente a atividade da quinase PDPK1, promovendo sua dissociação da proteína inibitória 14-3-3 YWHAQ.
• Subcelularmente, a SMAD3 localiza-se tanto no citoplasma quanto no núcleo, deslocando-se em resposta a sinais de sinalização.
• A proteína sofre múltiplas modificações pós-traducionais, incluindo fosforilação (por exemplo, em Thr179), acetilação, ADP-ribosilação e ubiquitinação, que modulam sua atividade e estabilidade. Ela também contém motivos de ligação de zinco e está sujeita a splicing alternativo.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• Para Western blotting (WB), use condições fosfo-específicas com coquetéis de inibidores de fosfatase e valide a especificidade usando um controle de peptídeo não fosforilado ou tratamento das amostras com fosfatase.
• Na imuno-histoquímica (IHC-P), a recuperação antigênica pode ser necessária, e a coloração fosfo-específica deve ser confirmada por comparação com a coloração de SMAD3 total em seções adjacentes.
• Para aplicações de ELISA, inclua uma curva padrão de peptídeo fosforilado e verifique cruzadamente com peptídeo não fosforilado para garantir a fosfo-especificidade.
• O anticorpo tem reatividade cruzada com SMAD3 de camundongo e rato, mas recomenda-se validar a homologia da sequência alvo e realizar experimentos piloto no sistema de amostra relevante.

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