Anticorpo Policlonal Anti-Fosfo-Smad5 (S463/S465) para WB, IHC-P, ELISA - Q99717

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do Smad5

• SMAD5 é um membro da família SMAD de transdutores de sinal intracelulares e moduladores transcricionais, também conhecido como JV5-1, Mothers against decapentaplegic homolog 5, ou MADH5.
• Após a ligação do ligante BMP, o SMAD5 é fosforilado em serinas conservadas no terminal C (incluindo S463 e S465) por receptores BMP do tipo I ativados, e então se associa ao SMAD4 para formar um complexo heteromérico que se transloca para o núcleo para regular a expressão de genes alvo. Referências relacionadas: PMID:9442019, PMID:33510867
• Como um fator de transcrição, o SMAD5 fosforilado reconhece Elementos de Ligação ao Smad (SBEs) nos promotores dos genes para modular diversos processos celulares, como desenvolvimento embrionário, diferenciação celular, angiogênese e homeostase tecidual. Referências relacionadas: PMID:12064918, PMID:16516194
• Em seu estado não fosforilado, o SMAD5 atua no citoplasma para influenciar o metabolismo energético interagindo com a hexoquinase 1 (HK1) para acelerar a glicólise e promovendo a respiração mitocondrial em resposta a mudanças no pH citoplasmático. Referências relacionadas: PMID:28675158
• O SMAD5 localiza-se predominantemente no citoplasma e no núcleo, mas também na mitocôndria, refletindo seus papéis multifuncionais.
• A proteína é expressa de forma onipresente nos tecidos e está sujeita a modificações pós-traducionais, incluindo fosforilação e acetilação; liga-se a DNA e íons de zinco.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunógeno é um peptídeo fosforilado sintético em torno de S463 e S465, sugerindo que o anticorpo reconhece especificamente o Smad5 fosforilado nesses locais alvo do receptor BMP. Considere o uso de inibidores de fosfatases durante o preparo da amostra para preservar a fosforilação.
• Para Western blot (WB), o peso molecular previsto é de 52 kDa; valide a detecção em lisatos celulares relevantes estimulados por BMP (por exemplo, amostras de humano, camundongo, rato).
• Para imuno-histoquímica (IHC-P), otimize a recuperação de antígeno e valide em cortes de tecido onde a sinalização BMP esteja ativa; considere o uso de controles de isotipo para confirmar a especificidade.
• Este anticorpo pode apresentar reação cruzada com Smad5 não fosforilado ou outros membros da família Smad; verifique a especificidade comparando sinais em amostras estimuladas vs. não estimuladas ou usando inibidores específicos.
• Em ELISA, use competição com peptídeo fosfo para confirmar a especificidade fosfo e calibre usando padrões conhecidos.

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