Anticorpo Monoclonal de Coelho Anti-Fosfo-Src-Y529 para WB e ELISA - P12931

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do Src

• O Src é um proto-oncogene que codifica uma tirosina quinase não receptora ativada por vários receptores, controlando a transcrição gênica, resposta imune, adesão celular, ciclo celular, apoptose e migração (PubMed:34234773). Referências relacionadas: PMID:34234773

• Nas adesões focais, o Src fosforila PTK2/FAK1 e paxilina após o engajamento da integrina, regulando a adesão e migração celular (PubMed:21411625). Referências relacionadas: PMID:21411625

• O Src contribui para a remodelação do citoesqueleto de actina através da fosforilação de AFAP1 e cortactina (CTTN).

• O SRC medeia a internalização do EGFR através da fosforilação da cadeia pesada de clatrina (CLTC) em Tyr-1477 (PubMed:18586953). Referências relacionadas: PMID:18586953

• Nos osteoclastos, o Src é essencial para a reabsorção óssea, formando um complexo com PTK2B/PYK2 e fosforilando CBL para ativar a sinalização PI3K (PubMed:14585963, PubMed:8755529). Referências relacionadas: PMID:14585963 PMID:8755529

• O Src localiza-se na membrana celular, adesões focais, citoplasma, citoesqueleto, núcleo, membrana interna mitocondrial e região perinuclear.

• Expresso de forma onipresente com os níveis mais altos em plaquetas, neurônios e osteoclastos; também detectado na pele (PubMed:22294297). Referências relacionadas: PMID:22294297

• A atividade da quinase Src é estritamente controlada por fosforilação, com a autofosforilação em Tyr-419 no loop de atuação promovendo a atividade (Por similaridade).

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• Para Western blot, use condições desnaturantes e redutoras; o peso molecular esperado é de aproximadamente 60 kDa. Inclua inibidores de fosfatases durante o preparo da amostra para preservar a fosforilação em Y529.
• No ELISA, o peptídeo imunógeno fosforilado pode ser empregado como antígeno de revestimento, e a especificidade deve ser confirmada por testes paralelos com um peptídeo de controle não fosforilado.
• Valide a reatividade em linhagens de células humanas conhecidas por expressar Src (ex: HeLa ou A549) em condições que estimulem a fosforilação de Y529, como privação de soro seguida de tratamento com pervanadato.
• Otimize as diluições do anticorpo empiricamente para cada aplicação; comumente, as diluições iniciais para WB variam de 1:500 a 1:2000, mas as concentrações de trabalho finais devem ser determinadas pelos usuários finais.

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