Anticorpo Monoclonal de Coelho Anti-Phospho-STAT1 (S727) para WB, IF/ICC, IHC-P, ELISA - P42224

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização de STAT1

• STAT1 (Transdutor de sinal e ativador da transcrição 1) existe em duas isoformas de splicing alternativo, STAT1-alfa (p91) e STAT1-beta (p84), que diferem no seu domínio de transativação C-terminal.
• Como mediador chave da sinalização por interferon (IFN), STAT1 sofre fosforilação em tirosina em resposta a IFNs do tipo I, forma heterodímeros com STAT2 e IRF9 para formar o complexo ISGF3, e induz a expressão de genes antivirais através de elementos ISRE. Referências relacionadas: PMID:28753426, PMID:35568036
• Sob estimulação de IFN do tipo II (IFN-gama), STAT1 é fosforilado tanto em resíduos de tirosina quanto de serina, forma homodímeros em GAF, e se liga a sequências GAS para ativar genes alvo. Referências relacionadas: PMID:8156998, PMID:26479788
• A sinalização de STAT1 também é desencadeada por KITLG/SCF e pode participar de vias mediadas por FGFR. Referências relacionadas: PMID:15526160, PMID:19088846
• Na imunidade inata, a endocitose de TLR4 após estimulação com LPS leva à fosforilação de STAT1 dependente de IKBKB em Thr-749, impulsionando a transcrição de ARID5A e IL12B. Referências relacionadas: PMID:32209697
• STAT1 é principalmente citoplasmático, mas sofre translocação nuclear após ativação; seu transporte subcelular é regulado por fosforilação e outras modificações pós-traducionais, incluindo acetilação, metilação e ubiquitinação.
• A fosforilação da serina 727 no domínio de transativação é essencial para a atividade transcricional máxima, e o anticorpo reconhece especificamente essa modificação, permitindo o estudo da dinâmica de ativação de STAT1.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunógeno é um peptídeo fosforilado sintético ao redor de Ser727 de STAT1 humano; certifique-se que a preparação da amostra inclua inibidores de fosfatases para preservar o epítopo fosforilado.
• Para Western blot, é esperada uma banda próxima a 87 kDa; um controle com anticorpo STAT1 não fosforilado pode ajudar a confirmar a fosfo-especificidade.
• Na imunofluorescência (IF/ICC), otimize a fixação e permeabilização para equilibrar a acessibilidade ao antígeno e a retenção do epítopo fosforilado; a fixação com metanol pode ser benéfica.
• Para imunohistoquímica (IHC-P), teste as condições de recuperação de antígeno cuidadosamente; considere usar controles fosfo-específicos, como o tratamento com lambda fosfatase.
• Ao usar ELISA, um experimento de bloqueio com fosfopeptídeo pode validar a especificidade do sinal.
• A reatividade cruzada com STAT1 de camundongo e rato está listada; no entanto, verifique o desempenho no seu sistema de modelo específico devido a potenciais diferenças dependentes da espécie na sequência ou na dinâmica de fosforilação.

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