Anticorpo Policlonal de Coelho Anti-Fosfo-Syk (Y525/526) para WB e ELISA - P43405

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da SYK

• A SYK (tirosina quinase do baço) é uma tirosina quinase não recetora que medeia a transdução de sinal a jusante de uma variedade de recetores transmembranares, regulando a imunidade inata e adaptativa, a adesão celular, a maturação de osteoclastos, a ativação de plaquetas e o desenvolvimento vascular. Referências relacionadas: PMID:12387735 PMID:33782605
• Essencial para a sinalização do recetor de células B (BCR), a SYK é necessária para a maturação das células B na transição de pró-B para pré-B. Referências relacionadas: PMID:12456653
• Após o envolvimento do BCR, a SYK fosforila adaptadores chave como o BLNK e efetores como o PLCG1, ligando o recetor ativado à mobilização de cálcio e vias de sinalização PKC.
• No sistema imunitário inato, a SYK é ativada por recetores de lectina tipo C (por exemplo, CLEC7A) após estimulação fúngica, desencadeando a produção de ROS, a ativação do inflamossoma e a transcrição de citocinas mediada por NF-κB.
• A SYK é necessária para a fagocitose de neutrófilos estimulada por IL-15, destacando o seu papel na função de células mieloides. Referências relacionadas: PMID:15123770
• A nível subcelular, a SYK localiza-se na membrana celular, no citoplasma e no citosol, translocando dinamicamente para recetores ativados.
• Amplamente expressa em células hematopoiéticas, com expressão proeminente em linhagens de células B (de pró-B a plasmócitos) e neutrófilos. Referências relacionadas: PMID:8163536
• As modificações pós-traducionais incluem a autofosforilação nos resíduos de tirosina 525 e 526 na alça de ativação, bem como a ubiquitinação, que regulam a atividade da quinase e a estabilidade da proteína.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• Como este anticorpo reconhece especificamente a fosforilação em Tyr525 e Tyr526, certifique-se de que os lisados celulares são preparados com inibidores de fosfatases para preservar a fosforilação. Para Western blot, valide o sinal tratando as amostras com lambda fosfatase ou comparando condições estimuladas vs. não estimuladas.
• Ao realizar ELISA, considere o uso de um antigénio de revestimento de peptídeo fosforilado e um peptídeo de controlo não fosforilado para confirmar a especificidade da fosforilação.
• As diluições ótimas do anticorpo para WB devem ser determinadas empiricamente; as diluições iniciais típicas para anticorpos policlonais variam de 1:500 a 1:2000.
• Não é esperada reatividade cruzada com outras espécies com base no design do imunogénio, mas isso não foi verificado experimentalmente.

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