Anticorpo Policlonal de Coelho Anti-Ubiquitina Fosforilada-Ser65 para WB, ELISA - P62979 / P62987 / P0CG47 / P0CG48

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da Ubiquitina

• A ubiquitina é uma proteína de 76 aminoácidos altamente conservada, expressa a partir de quatro genes (RPS27A, UBA52, UBB, UBC), que originam proteínas de fusão (por exemplo, ubiquitina-proteína ribossomal eS31 e eL40) e precursores de poliubiquitina.
• Ela atua como modificador pós-traducional por conjugação covalente a resíduos de lisina de proteínas alvo, formando cadeias monoméricas ou poliubiquitinas. Diferentes tipos de ligação (Lis-6, -11, -29, -33, -48, -63 e linear) determinam diversos resultados celulares, incluindo degradação proteassomal (Lis-48), reparo do DNA (Lis-6/63), endocitose e sinalização de NF-κB (Lis-63).
• Como fusão com a proteína ribossomal eS31, a ubiquitina é parte integrante da subunidade 40S do ribossomo e essencial para a montagem do processossomo da subunidade pequena e a biogênese ribossomal. Referências relacionadas: PMID:23636399 PMID:9582194 PMID:34516797
• A ubiquitina localiza-se predominantemente no citoplasma e no núcleo, incluindo o nucléolo, o que é consistente com seus papéis na degradação proteica, sinalização e biogênese ribossomal.
• Modificações pós-traducionais, incluindo fosforilação em Ser65, acetilação e ADP-ribosilação, regulam a estrutura e função da ubiquitina. A fosforilação em Ser65 modula especificamente a montagem da cadeia de ubiquitina e está implicada na mitofagia e na sinalização imune inata.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• Para Western blot, considere o uso de inibidores de fosfatase nos tampões de lise para preservar a fosforilação em Ser65.
• Valide a fosforo-especificidade tratando as amostras com lambda fosfatase; o sinal deve desaparecer após a desfosforilação.
• Inclua controles positivos e negativos adequados (por exemplo, células estimuladas vs. não estimuladas) para confirmar a especificidade do anticorpo.
• Para ELISA, otimize a concentração do antígeno de revestimento e a diluição do anticorpo para obter a melhor relação sinal-ruído.
• Observe que o anticorpo pode reconhecer a ubiquitina de todos os quatro genes devido à conservação da sequência ao redor de Ser65; considere o uso de knockdown gene-específico se necessário.

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