Anticorpo Policlonado de Coelho Anti-Fosfo-Zap70-Y319+Syk-Y352 para WB, IF/ICC, ELISA - P43403/P43405

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da ZAP70

• A ZAP70 (proteína associada à cadeia zeta de 70 kDa) é uma tirosina quinase citoplasmática pertencente à família Syk, também conhecida como tirosina quinase relacionada à Syk (SRK).
• Essencial para a sinalização do receptor de linfócitos T (TCR): após a ligação do TCR, a ZAP70 é recrutada para os motivos ITAM fosforilados nas cadeias CD3, onde é fosforilada e ativada pela LCK, iniciando cascatas de sinalização a jusante. Referências relacionadas: PMID:7509083
• A ZAP70 ativada fosforila as proteínas adaptadoras LAT e LCP2, desencadeando uma rede de sinalização que regula a ativação, proliferação, produção de citocinas e diferenciação de linfócitos T.
• Além da sinalização do TCR, a ZAP70 controla a adesão, motilidade e reorganização do citoesqueleto de linfócitos T; também medeia a internalização e degradação do TCR por interação com CBL, SLA e SLA2, modulando assim os níveis de TCR na superfície celular.
• A ZAP70 também contribui para o desenvolvimento e ativação de linfócitos B através da sinalização do receptor de linfócitos B (BCR).
• Durante o desenvolvimento de timócitos, a ZAP70 promove a sobrevivência e a progressão do ciclo celular de timócitos duplamente negativos (CD4/CD8) antes da seleção positiva.
• Localização subcelular: predominantemente citoplasmática, mas transloca para a membrana plasmática após estimulação do TCR.
• Expressão tecidual: principalmente em linfócitos T e células natural killer, com níveis mais baixos em timócitos precoces e células pro/pré-B.
• Suas principais características incluem domínios SH2 tandem no terminal N que se ligam a ITAMs fosforilados, um domínio quinase com sítio de ligação ao ATP e múltiplos sítios de fosforilação (ex: Y319) que regulam a atividade; anotado com palavras-chave como fosfoproteína, splicing alternativo e variante de doença.

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• O imunógeno é um fosfopeptídeo sintético ao redor de Y319 da ZAP70 humana; o anticorpo também reconhece o Y352 fosforilado correspondente da Syk devido à similaridade de sequência ao redor do sítio de fosforilação.
• Para western blotting, considere usar lisados de linhas de células T estimuladas com anti-CD3 ou pervanadato para induzir uma fosforilação robusta; inclua um controle de desfosforilação (ex: tratamento com λ-fosfatase) para confirmar a especificidade por fosforilação.
• Em imunofluorescência/ICC, otimize as condições de fixação e permeabilização para preservar tanto o epítopo fosforilado quanto a arquitetura celular; use uma contracoloração com um anticorpo anti-ZAP70 total para avaliar o status de ativação.
• Para ELISA, pode ser utilizado um antígeno de revestimento de fosfopeptídeo; certifique-se que as etapas de bloqueio minimizem a ligação não específica.
• A reatividade cruzada com camundongo permite a detecção em modelos murinos de linfócitos T; no entanto, valide a reatividade no sistema experimental específico.
• O peso molecular previsto da ZAP70 é de ~70 kDa; para a Syk, detecte a isoforma de ~72 kDa. Em WB, isso pode aparecer como bandas próximas ou uma única banda dependendo da resolução.

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