Anticorpo Policlonal de Coelho Anti-Fosfo-ZAP70 (Y493) para WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA - P43403

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da ZAP70

• ZAP70 (proteína associada à cadeia zeta de 70 kDa) é uma tirosina quinase citoplasmática essencial para a regulação imune adaptativa, mediando a sinalização do receptor de células T (TCR) após apresentação de antígeno (PubMed:7509083). Referências relacionadas: PMID:7509083
• A proteína contém domínios SH2 em tandem que se ligam a motivos ITAM fosforilados nas cadeias CD3, aliviando a autoinibição e permitindo a fosforilação mediada por LCK na Tyr493 para ativação completa.
• Após a ativação, a ZAP70 fosforila adaptadores-chave LAT e LCP2, desencadeando cascatas a jusante que regulam a proliferação de células T, produção de citocinas e reorganização do citoesqueleto.
• A ZAP70 está envolvida no desenvolvimento dos timócitos, promovendo a sobrevivência e progressão do ciclo celular de células duplo-negativas CD4/CD8 antes da seleção positiva.
• Também contribui para o desenvolvimento e ativação de células B através da sinalização do receptor de células B, destacando papéis linfoides mais amplos.
• A localização subcelular é principalmente citoplasmática, com recrutamento para a membrana plasmática após engajamento do TCR; também participa da internalização do TCR via ubiquitinação mediada por CBL.
• Expressa predominantemente em células T, células natural killer, timócitos precoces e células pré/pró-B, com defeitos genéticos causando imunodeficiência combinada grave (SCID) e condições autoimunes.
• Modificações pós-traducionais incluem fosforilação de tirosina, acetilação e ubiquitinação, críticas para sua regulação dinâmica.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• Como um anticorpo fosfo-específico direcionado à Tyr493, garanta que as amostras sejam tratadas com inibidores de fosfatase durante a lise e considere o tratamento com fosfatase como um controle negativo.
• Para Western blot, o peso molecular previsto é de aproximadamente 70 kDa; use uma porcentagem de gel apropriada (ex.: 8-10%) para resolução ideal.
• Valide a especificidade do anticorpo em seu sistema modelo usando competição com peptídeo ou abordagens de knockdown/knockout genético.
• Para imuno-histoquímica (IHC-P), a recuperação antigênica pode ser necessária; teste tampões de recuperação de pH 6 ou pH 9.
• Na imunofluorescência (IF/ICC), monitore a localização na membrana após estimulação; condições de permeabilização e fixação devem ser otimizadas.
• ELISA e outras aplicações podem exigir titulação para determinar a concentração de trabalho ideal.

CamelBio: Sua Ponte de Fornecimento Tudo-em-Um

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