Anticorpo Policlonal de Coelho Anti-PI3 Kinase p85 beta para WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA - O00459

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da PI3 Kinase p85 beta

• Codificada pelo gene PIK3R2, a PI3 Kinase p85 beta (subunidade reguladora beta da fosfatidilinositol 3-quinase) é uma subunidade reguladora de 85 kDa da PI3K de classe IA.
• Associa-se à subunidade catalítica p110 para formar a PI3K ativa, que fosforila PtdIns(4,5)P2 para produzir o segundo mensageiro PIP3 na membrana plasmática.
• O PIP3 recruta proteínas contendo domínio PH, como AKT1 e PDPK1, ativando cascatas de sinalização que impulsionam o crescimento celular, sobrevivência, proliferação, motilidade e morfologia.
• Através do seu domínio SH2, a p85 beta liga-se a proteínas tirosina quinases fosforiladas (por exemplo, receptores de fatores de crescimento ativados), funcionando como um adaptador para localizar a subunidade catalítica p110 na membrana.
• Foi demonstrado que regula indiretamente a autofagia (PubMed:23604317). Referências relacionadas: PMID:23604317
• A p85 beta promove a translocação nuclear do isoforma 2 do XBP1 sob estresse do retículo endoplasmático e/ou estimulação com insulina no fígado, contribuindo assim para uma melhora na tolerância à glicose.
• A proteína contém domínios SH2 e SH3, é fosforilada após a ativação da PI3K e pode sofrer conjugação de ubiquitina; mutações estão associadas a variantes da doença.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunógeno corresponde à região N-terminal (aa 1–85) da p85 beta humana; esta região pode ser menos conservada, potencialmente fornecendo especificidade de isoforma, mas a reatividade cruzada com a p85 alfa deve ser considerada e validada no sistema de amostra relevante.
• Para WB, use lisados de células inteiras de linhagens celulares ou tecidos humanos, de camundongo ou de rato; a banda esperada é de aproximadamente 82 kDa. Um controle positivo (por exemplo, lisado de HeLa ou NIH/3T3) é recomendado.
• IHC-P e IF/ICC podem exigir otimização da recuperação de antígenio (tampão de citrato mediado por calor, pH 6,0) e permeabilização (0,1% Triton X-100). Valide a especificidade do sinal usando peptídeo de bloqueio ou controles de knockout.
• Em ELISA, este anticorpo pode ser usado como reagente de captura ou detecção; o emparelhamento com um anticorpo de detecção p85 beta adequado é necessário para ensaios quantitativos.
• Como a p85 beta é uma proteína intracelular ubiquitamente expressa, certifique-se de uma fixação e permeabilização adequadas para IF/ICC e considere a co-coloração com marcadores específicos de compartimento para confirmar a localização.

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