Anticorpo Policlonal de Coelho Anti-PI4KA para WB, IF/ICC, ELISA - P42356

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do PI4KA

• O PI4KA (Fosfatidilinositol 4-quinase alfa), também conhecido como PIK4CA ou PI4K-ALPHA, é uma quinase de lipídio que catalisa a fosforilação do fosfatidilinositol em fosfatidilinositol 4-fosfato, o primeiro passo comprometido na geração do segundo mensageiro inositol-1,4,5-trisfosfato.
• Esta enzima desempenha um papel central nas vias de sinalização de fosfoinositídeos, regulando o tráfego de membrana, a proliferação celular e a homeostase do cálcio intracelular.
• Existem múltiplas isoformas devido ao splicing alternativo; a isoforma canônica é uma grande proteína com um peso molecular de aproximadamente 237 kDa.
• O PI4KA localiza-se principalmente no citoplasma e na membrana celular, onde se associa à membrana plasmática para exercer sua atividade de quinase.
• A expressão tecidual é onipresente, com os níveis mais altos na placenta e no cérebro; a expressão é baixa ou ausente no pulmão, fígado, pâncreas, testículo e leucócitos.
• A proteína contém um domínio de ligação de ATP e um domínio de quinase de lipídio, e sua atividade é regulada por fosforilação.
• Mutações no PI4KA estão associadas à paraplegia espástica hereditária (SPG84) e a outros distúrbios neurológicos, destacando sua importância na função neuronal.
• Palavras-chave do UniProt incluem splicing alternativo, ligação de ATP, variante de doença, paraplegia espástica hereditária, quinase, metabolismo de lipídios, membrana, neurodegeneração e fosfoproteína.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunógeno corresponde à região C-terminal (aa 1780-1860); o anticorpo pode reconhecer epítopos neste segmento, garantindo a detecção do PI4KA de comprimento total.
• Devido ao grande tamanho da proteína (237 kDa), use um gel de SDS-PAGE com baixa porcentagem (por exemplo, 6-8%) e tempos de transferência estendidos para Western blot.
• Para imunofluorescência/ICC, otimize as condições de fixação e permeabilização; Triton X-100 ou digitonina podem ser usados para detectar PI4KA associado à membrana.
• Valide a especificidade do anticorpo em linhagens de células relevantes (por exemplo, HeLa, SH-SY5Y) ou tecidos conhecidos por expressar PI4KA, e inclua um controle negativo, como lisados de pulmão ou fígado, onde a expressão é baixa.
• Para ELISA, considere o uso de um fragmento recombinante de PI4KA como padrão para estabelecer a sensibilidade do ensaio e a faixa linear.

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