Anticorpo policlonal de coelho anti-PIF4 para WB e ELISA - Q8W2F3

Especificações e parâmetros principais do produto

Contexto biológico: função e localização do fator de transcrição PIF4

• O fator de transcrição PIF4, também conhecido como AtPIF4, bHLH9, EN102 e SRL2, é uma proteína básica hélice-alça-hélice codificada pelo gene PIF4 em Arabidopsis thaliana. Ele integra sinais de luz e temperatura para regular o crescimento.
• Atua negativamente na sinalização do fitocromo B, controlando a expressão de genes envolvidos na expansão celular por meio da ligação a motivos G-box (por similaridade).
• É ativado pelos criptocromos CRY1 e CRY2 sob baixa intensidade de luz azul, ligando-se diretamente a variantes do E-box (5'-CA[CT]GTG-3') na cromatina para estimular a expressão gênica em respostas adaptativas, como o alongamento do hipocótilo. Referências relacionadas: PMID:26724867
• Coopera com o coativador transcricional PTAC12/HMR/PAP5 e a subunidade MED14 do complexo mediador para regular genes de crescimento responsivos à temperatura, principalmente aqueles envolvidos na biossíntese e sinalização de auxina, promovendo a termomorfogênese, como o alongamento do hipocótilo em temperaturas elevadas. Referências relacionadas: PMID:30635559 PMID:33824329 PMID:36063057
• Localiza-se exclusivamente no núcleo, em conformidade com seu papel como fator de transcrição.
• É predominantemente expresso em folhas, caules e plântulas, com níveis mais baixos em frutos, flores e raízes, indicando sua importância no crescimento vegetativo.
• Está sujeito a splicing alternativo, gerando variantes proteicas que podem ajustar sua atividade em diferentes contextos de desenvolvimento e ambientais.
• Peso molecular: 48,4 kDa (calculado a partir da sequência); anotado como parte do proteoma de referência e envolvido na sinalização de fitocromos, na regulação da transcrição e nas respostas ao estresse.

Orientações experimentais e dicas técnicas

• O imunógeno utilizado é um peptídeo sintético abrangendo os aminoácidos 300-400 de PIF4 de Arabidopsis (NP_565991.2). Devido à natureza policlonal deste anticorpo, ele pode reconhecer múltiplos epítopos e potencialmente apresentar reação cruzada com proteínas bHLH estreitamente relacionadas; recomenda-se a validação no sistema experimental específico.
• Para Western blot, utilize extratos celulares totais ou enriquecidos em núcleo de tecidos de Arabidopsis thaliana, como plântulas ou folhas, nos quais PIF4 é altamente expresso. A detecção ideal pode exigir a otimização do bloqueio e da diluição do anticorpo.
• Este anticorpo é adequado para ELISA, que pode ser utilizado para a detecção quantitativa dos níveis da proteína PIF4 em lisados vegetais. Considere utilizar uma curva padrão com proteína PIF4 recombinante para uma quantificação precisa.
• Como PIF4 atua em vias de sinalização de luz e temperatura, as condições experimentais (regime de luz, temperatura) devem ser cuidadosamente controladas para evitar modulação não intencional da expressão de PIF4.
• O peso molecular previsto é de 48 kDa; monitore a presença de possíveis bandas de degradação e inclua inibidores de protease durante a preparação das amostras.

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