Anticorpo Monoclonal Anti-PKA C-alpha (PRKACA) (Validado por KD) para WB, IF/ICC, ELISA - P17612

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do PKA C-alpha (PRKACA)

• O PRKACA codifica a subunidade catalítica alfa da proteína quinase dependente de cAMP (PKA), uma serina/treonina quinase que fosforila numerosos substratos citoplasmáticos e nucleares, desempenhando um papel central nas cascatas de sinalização do cAMP (PubMed:15642694, PubMed:15905176, PubMed:16387847). Referências relacionadas: PMID:15642694 PMID:15905176 PMID:16387847

• A enzima modula a estrutura da cromatina e a transcrição fosforilando a histona H1.4 e a subunidade p50 do NF-kappa-B (NFKB1), influenciando a expressão gênica e a atividade de ligação ao DNA (PubMed:15178447, PubMed:15642694, PubMed:15905176). Referências relacionadas: PMID:15178447 PMID:15642694 PMID:15905176

• Nas plaquetas, o PRKACA fosforila a VASP para manter as plaquetas circulantes em estado de repouso; após a ruptura por trombina ou colágeno, o PRKACA ativo livre promove a agregação plaquetária (PubMed:15642694, PubMed:20356841). Referências relacionadas: PMID:15642694 PMID:20356841

• O PRKACA atua como um inibidor chave da via de sinalização smoothened fosforilando os fatores de transcrição GLI (GLI1, GLI2, GLI3), promovendo seu processamento e impedindo a ativação de genes alvo na ausência de ligantes hedgehog (PubMed:16705181, PubMed:36202993, PubMed:39138140). Referências relacionadas: PMID:16705181 PMID:36202993 PMID:39138140

• A nível subcelular, o PRKACA localiza-se no citoplasma, núcleo, membrana celular, mitocôndrias e projeções específicas como cílios e flagelos, refletindo seus diversos papéis regulatórios. A expressão tecidual é específica da isoforma: a isoforma 1 é ubíqua, enquanto a isoforma 2 é específica do esperma e enriquecida em espermatócitos paquítenos.

• Modificações pós-traducionais, incluindo miristoilação N-terminal e fosforilação, regulam sua atividade catalítica, direcionamento subcelular e estabilidade. O splicing alternativo dá origem às isoformas distintas.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• Este anticorpo foi gerado usando a proteína recombinante humana PRKACA; ele apresenta reatividade cruzada com humano, mouse e rato, sendo adequado para estudos nessas espécies. Valide os níveis de expressão endógena em seu sistema modelo antes de análises quantitativas.
• Para WB, o peso molecular esperado é de aproximadamente 41 kDa; inclua controles positivos e negativos apropriados (por exemplo, lisados superexpressando PRKACA e tratados com siRNA) para confirmar a especificidade da banda.
• Para IF/ICC, considere protocolos de fixação/permeabilização que preservem a antigenicidade; espere padrões de coloração citoplasmática e nuclear consistentes com a localização relatada.
• Para ELISA, titule o anticorpo para uma relação ideal sinal-ruído e pareie com um anticorpo secundário adequado; valide o desempenho usando proteína recombinante ou lisados celulares.
• O status validado por KD indica que a especificidade do anticorpo foi confirmada usando abordagens de knockdown mediadas por siRNA ou shRNA; considere incluir controles de knockdown em seus ensaios para verificar ainda mais a dependência do sinal em relação à expressão do alvo.

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