Anticorpo monoclonal de coelho anti-PKA C-alfa para WB, IF/ICC, IHC-P, ELISA - P17612

Especificações e parâmetros principais do produto

Contexto biológico: função e localização da PKA C-alfa

• A PKA C-alfa, codificada pelo gene PRKACA, é a subunidade catalítica alfa da proteína-quinase dependente de cAMP. Existem duas isoformas: a isoforma 1 é expressa ubiquamente, enquanto a isoforma 2 é específica dos espermatozoides e está enriquecida nos espermatócitos paquítenos.
• Como serina/treonina-quinase, fosforila numerosos substratos no citoplasma e no núcleo, incluindo NFKB1 (PubMed:15642694), VASP (PubMed:15642694, PubMed:20356841), RYR2 (PubMed:17693412) e ABL1 (PubMed:15178447). Esses eventos regulam a agregação plaquetária, a sinalização de cálcio e a capacitação espermática. Referências relacionadas: PMID:15642694, PMID:20356841, PMID:17693412, PMID:15178447
• Ela se localiza em múltiplos compartimentos, incluindo citoplasma, núcleo, membrana celular, mitocôndrias, cílios e vesículas secretoras, refletindo seus diversos papéis regulatórios.
• Na via de sinalização Hedgehog, a PKA C-alfa atua como um inibidor essencial ao fosforilar os fatores de transcrição GLI (PubMed:16705181). Essa fosforilação promove o processamento de GLI e impede a ativação dos genes-alvo, um processo antagonizado pelo sequestro mediado por SMO (PubMed:36202993, PubMed:39138140). Referências relacionadas: PMID:16705181, PMID:36202993, PMID:39138140
• A proteína é miristoilada e contém domínios de ligação a nucleotídeos e de quinase, sendo classificada como uma lipoproteína e uma transferase. Variantes associadas a doenças estão relacionadas à síndrome de Cushing.
• Ela também fosforila CDC25B para impedir a retomada da meiose em ovócitos interrompidos na prófase (por similaridade) e regula as junções estreitas por meio da fosforilação de CLDN3 (PubMed:15905176). Referências relacionadas: PMID:15905176

Orientações experimentais e dicas técnicas

• O imunógeno (aminoácidos 1–351 da PKA C-alfa humana) abrange quase toda a proteína, sugerindo o reconhecimento de ambas as isoformas. Considere validar a especificidade para cada isoforma utilizando amostras específicas de isoformas (por exemplo, células espermáticas para a isoforma 2).
• Para Western blot, o peso molecular esperado é de aproximadamente 40–41 kDa. Utilize controles positivos apropriados (por exemplo, lisados de HeLa e Jurkat) e valide o desempenho no tecido-alvo.
• Na imunofluorescência/ICC, espera-se coloração nuclear e citoplasmática; verifique a localização subcelular nas suas condições experimentais.
• Para ELISA, combine com um anticorpo de captura adequado e confirme o desempenho utilizando PKA C-alfa recombinante ou amostras biológicas relevantes.

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