Anticorpo Policlonal de Coelho Anti-PKM1/2 para WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA - P14618

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do PKM1/2

• Catalisa a etapa final limitante da velocidade da glicólise transferindo um grupo fosforil do fosfoenolpiruvato (PEP) para o ADP, gerando ATP.
  Referências relacionadas:
  PMID:15996096 | PMID:1854723 | PMID:20847263
• A razão entre a forma tetramérica altamente ativa e a forma dimérica quase inativa determina se os carbonos da glicose são canalizados para processos biossintéticos ou usados para a produção de ATP glicolítico, uma chave crítica para a proliferação e sobrevivência de células tumorais.
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• A isoforma M2 (PKM2), predominante durante a embriogênese e em tumores, exibe baixa atividade basal de piruvato quinase e requer ativação alostérica por D-frutose 1,6-bisfosfato. Além de seu papel metabólico, o PKM2 transloca para o núcleo mediante sinalização, onde atua como uma proteína quinase, fosforilando o STAT3 em Tyr-705 e a histona H3 em Thr-11 para impulsionar a transcrição de genes como VEGFA e CD274, promovendo angiogênese e evasão imune.
  Referências relacionadas:
  PMID:18337823 | PMID:20847263 | PMID:18191611 | PMID:21620138 | PMID:22056988 | PMID:22306293 | PMID:22901803 | PMID:24120661 | PMID:33314660 | PMID:26787900
• A isoforma M1 (PKM1), expressa em tecidos adultos, apresenta atividade constitutivamente alta de piruvato quinase independente de ativadores alostéricos, substituindo funcionalmente o M2 após o nascimento.
  Referências relacionadas:
  PMID:18337823 | PMID:20847263
• A localização subcelular é dinâmica: o PKM1/2 reside predominantemente no citoplasma, mas, no caso do PKM2, vários estímulos como o EGF desencadeiam a translocação nuclear, onde a homodimerização permite suas funções de proteína quinase.
  Referências relacionadas:
  PMID:22056988 | PMID:22306293 | PMID:22901803
• Especificidade tecidual: o PKM2 é especificamente enriquecido em células proliferativas, incluindo células-tronco embrionárias e células cancerígenas, enquanto o PKM1 é encontrado em muitos tecidos adultos, mas é notavelmente ausente em células tumorais.
  Referências relacionadas:
  PMID:18337823
• Modificações pós-traducionais, incluindo acetilação, fosforilação, hidroxilação e ubiquitinação, ajustam finamente a atividade, estabilidade e tráfego subcelular do PKM1/2, destacando seu papel como um hub regulador no metabolismo e sinalização.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunógeno abrange os resíduos 11–221 do PKM1/2 (NP_001193728.1), uma região conservada entre PKM1 e PKM2; os pesquisadores devem validar a especificidade da isoforma em seu sistema experimental.
• Para Western blot (WB), espera-se uma banda em torno de 58 kDa. Inclua lisatos de controle positivos e negativos apropriados (por exemplo, câncer vs. tecido normal) para confirmar a reatividade.
• Em imuno-histoquímica (IHC-P), recomenda-se a otimização da recuperação de antígeno e da diluição do anticorpo para seções fixadas em formalina e embebidas em parafina.
• Para imunofluorescência (IF/ICC), otimize a fixação e a permeabilização para preservar a localização dupla citoplasmática/nuclear do PKM2 sob estímulos específicos.
• Em aplicações de ELISA, determine a concentração ideal do anticorpo e as condições de revestimento empiricamente usando protocolos indiretos ou sanduíche padrão.

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