Anticorpo Monoclonal Anti-PKM2 para WB, IF/ICC, IP, ELISA - P14618

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da PKM2

• A PKM2 catalisa o passo limitante final da glicólise, transferindo um grupo fosforil do fosfoenolpiruvato (PEP) para o ADP, gerando ATP. A atividade da enzima é regulada por um equilíbrio dinâmico entre um tetrâmero altamente ativo e um dímero quase inativo, determinando o destino dos carbonos da glicose para produção de energia ou biossíntese. Referências relacionadas: PMID:15996096 PMID:1854723 PMID:20847263
• O gene PKM gera dois isoformas principais via splicing alternativo: a isoforma adulta M1 (PKM1) e a isoforma embrionária M2 (PKM2). A PKM2 possui baixa atividade intrínseca de piruvato quinase e requer ativação alostérica por D-frutose 1,6-bisfosfato (FBP), enquanto a PKM1 é constitutivamente ativa. Referências relacionadas: PMID:18337823 PMID:20847263
• Além do seu papel metabólico citoplasmático, a PKM2 funciona como uma proteína quinase nuclear. Após estímulos como a ativação do receptor de EGF, a PKM2 transloca para o núcleo e fosforila alvos incluindo STAT3 na Tyr-705 e histona H3 na Thr-11, promovendo a transcrição de genes envolvidos na proliferação celular, angiogênese (ex., VEGFA) e tumorigênese. Referências relacionadas: PMID:18191611 PMID:21620138 PMID:22056988 PMID:22306293 PMID:22901803 PMID:24120661 PMID:33314660 PMID:26787900 PMID:17308100
• A PKM2 é predominantemente expressa em células altamente proliferativas, incluindo células-tronco embrionárias, células de carcinoma embrionário e células cancerígenas, tornando-a um biomarcador tumoral bem estabelecido. A isoforma adulta PKM1 é expressa em tecidos adultos normais e geralmente está ausente em tumores. Referências relacionadas: PMID:18337823
• A PKM2 localiza-se tanto no citoplasma quanto no núcleo. Sua translocação nuclear é induzida por várias vias de sinalização e é crítica para suas funções não metabólicas e oncogênicas.
• Modificações pós-traducionais como acetilação, fosforilação, hidroxilação e metilação regulam rigorosamente a atividade metabólica, estabilidade proteica e importação nuclear da PKM2, ligando o estado metabólico celular às redes de sinalização.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunógeno é um peptídeo sintético abrangendo os aminoácidos 380–480 da PKM2 humana (NP_002645.3), que reside na região C-terminal única que distingue a PKM2 da isoforma M1. Este desenho sugere alta especificidade para PKM2 em relação à PKM1.
• Para Western blot, o peso molecular previsto da PKM2 é de aproximadamente 58 kDa. Valide o desempenho do anticorpo usando controles positivos apropriados (ex., linhagens celulares de câncer humano) e considere otimizar a diluição do anticorpo primário e os tempos de exposição.
• Na imunofluorescência/imunocitoquímica (IF/ICC), teste diferentes protocolos de fixação e permeabilização para preservar a localização da PKM2, pois ela pode ser tanto citoplasmática quanto nuclear.
• Para imunoprecipitação (IP), use condições de lise nativas para manter complexos proteicos e confirme a eficiência de captura do alvo.
• Ao realizar ELISA, estabeleça curvas padrão com proteína PKM2 recombinante e valide a sensibilidade e especificidade na matriz de amostra relevante.
• A reatividade cruzada com PKM2 de rato e rato está indicada; verifique o reconhecimento do alvo em seu sistema experimental específico usando controles específicos da espécie.

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