Anticorpo Policlonal Anti-PLK3 para WB, ELISA - Q9H4B4

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da PLK3

• Identidade proteica e família: A serina/treonina-proteína quinase PLK3 (também conhecida como quinase serina/treonina-proteína induzida por citocinas, quinase induzida por FGF, quinase relacionada à proliferação) é um membro da família das quinases semelhantes a polo. Contém um domínio catalítico e domínios da caixa POLO que mediam o reconhecimento do substrato por meio da ligação dependente de fosforilação.
• Regulação do ciclo celular: A PLK3 é necessária para a entrada na fase S e na citocinese. Ela regula o checkpoint G2 e a progressão mitótica por fosforilação de CDC25C e BCL2L1, influenciando as transições do ciclo celular.
• Resposta ao estresse e dano ao DNA: A PLK3 é ativada rapidamente após estímulos de estresse, como radiação ionizante, espécies reativas de oxigênio (ERO), estresse hiperosmótico, irradiação UV e hipóxia. Ela fosforila p53/TP53 para promover a apoptose, CHEK2 para reforçar o checkpoint G2/M e p73/TP73 para inibir suas funções pró-apoptóticas.
• Alvos principais de fosforilação: Os substratos da PLK3 incluem ATF2, BCL2L1, CDC25A, CDC25C, CHEK2, HIF1A, JUN, p53/TP53, p73/TP73, PTEN, TOP2A e VRK1. Essas interações mediam seus papéis no controle de checkpoints, apoptose e dinâmica do Golgi.
• Desmontagem do Golgi: A PLK3 participa da fragmentação do Golgi durante a mitose por meio de uma via dependente de MEK1/MAP2K1, fosforilando VRK1 no aparelho de Golgi, garantindo a partição adequada das organelas.
• Localização subcelular: A PLK3 exibe localização dinâmica no citoplasma, núcleo, nucléolo, aparelho de Golgi e centrossomo, o que é consistente com suas funções multifacetadas no ciclo celular e na sinalização de estresse.
• Expressão tissular e na diferenciação: Os transcritos são altamente detectados na placenta, pulmão, músculo esquelético, coração, pâncreas, ovários e rim; fracamente no fígado e cérebro. Em células hematopoiéticas, a PLK3 é forte e especificamente expressa em macrófagos terminadamente diferenciados. A expressão é regulada negativamente em tumores pulmonares primários.
• Modificações pós-traducionais e palavras-chave: A PLK3 é classificada como uma fosfoproteína (identificação por proteômica) com ligação a ATP e atividade de serina/treonina-proteína quinase. As palavras-chave da UniProt incluem apoptose, ciclo celular, dano ao DNA, aparelho de Golgi e proteoma de referência.

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• O imunógeno abrange os aminoácidos 487–646 (região C-terminal), cobrindo parte do segundo domínio da caixa POLO. Esta região pode oferecer especificidade dentro da família PLK; a reatividade cruzada com PLK1 ou PLK2 deve ser confirmada experimentalmente, se necessário.
• Para Western blot (WB), o peso molecular previsto é de ~72 kDa. Valide a detecção na espécie pretendida (humano, camundongo, rato) e no tipo de amostra. Use controles de carregamento adequados e considere o knockdown mediado por siRNA ou lisados de knockout para verificar a identidade da banda.
• Aplicações de ELISA podem ser otimizadas testando condições de revestimento e diluições do anticorpo; o anticorpo é fornecido como policlonal de coelho, adequado para protocolos padrão de ELISA indireto.
• Para estudar vias induzidas por estresse, trate as células com agentes danificadores do DNA (por exemplo, etoposida, UV), indutores de ERO (por exemplo, H₂O₂) ou mímicos de hipóxia (por exemplo, CoCl₂) e confirme a ativação da PLK3 ou alterações na expressão por WB.
• Para imunofluorescência ou imunohistoquímica, os usuários devem estabelecer condições de fixação e permeabilização compatíveis com os compartimentos subcelulares detectados (citoplasmático, nuclear, Golgi). Observe que os níveis endógenos de PLK3 podem ser baixos em alguns tipos de células; o enriquecimento ou a amplificação do sinal podem ser necessários.

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