Anticorpo Monoclonal de Coelho Anti-PLOD2/LH2 para WB, ELISA - O00469

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do PLOD2/LH2

• O PLOD2 codifica a procolagénio-lisina,2-oxoglutarato 5-dioxigenase 2 (lisil hidroxilase 2, LH2), um membro da família das lisil hidroxilases que modifica resíduos de lisina do colágeno.
• A LH2 catalisa a hidroxilação dos resíduos de lisina nas sequências -Xaa-Lys-Gly- dentro do colágeno, formando hidroxilisina; estas hidroxilisinas servem como locais de fixação para hidratos de carbono e são críticas para a estabilidade das ligações cruzadas intermoleculares do colágeno.
• A enzima localiza-se na membrana do retículo endoplasmático rugoso e no citoplasma, onde ocorre a modificação co-traducional do colágeno.
• A expressão tecidual é mais elevada no pâncreas e no músculo; as isoformas 1 e 2 são amplamente expressas, sendo a isoforma 2 especificamente detetada na pele, pulmão, dura e aorta.
• Múltiplas variantes de transcrição codificam diferentes isoformas; as modificações pós-traducionais incluem glicosilação, fosforilação e ligação de ferro/metal, sendo necessário ascorbato (vitamina C) como cofator.
• O PLOD2 está associado a variantes de doença ligadas à osteogénese imperfeita, e a proteína serve como componente do proteoma de referência na identificação proteómica.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunógeno é uma proteína de fusão recombinante que cobre os aminoácidos 260–380 do PLOD2/LH2 humano (NP_000926.2); confirme que a região do epítopo está presente na sua isoforma e espécie alvo.
• Para o western blot (WB), recomenda-se a utilização de um tampão de carga redutor e um gel SDS-PAGE de 6–8% para resolver a proteína de ~85 kDa; considere otimizar a concentração do anticorpo entre 0,1–1 μg/mL.
• Em aplicações de ELISA, podem ser utilizados formatos indiretos ou de captura; valide a adequação do par de anticorpos para ensaios sanduíche se estiver a desenvolver testes quantitativos.
• A reatividade cruzada é reportada com humano e rato; a reatividade com espécies adicionais deve ser verificada pelo alinhamento de sequências da região do imunógeno.
• Execute controlos adequados, incluindo linhas celulares produtoras de colágeno (por exemplo, fibroblastos, osteoblastos) e controlos negativos (por exemplo, lisados com knockdown ou knockout de PLOD2).

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