Anticorpo Monoclonal Anti-PMEL (gp100) para WB, IHC-P, ELISA - P40967

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do PMEL

• A proteína de melanócitos PMEL (também conhecida como gp100, HMB-45 ou SILV) é uma proteína do premelanossomo que desempenha um papel central na morfogênese e pigmentação do melanossomo.
• Durante a maturação do melanossomo, fragmentos amiloidogênicos processados do PMEL se montam em folhas fibrilares paralelas, impulsionando o alongamento dos premelanossomos de estágio I em melanossomos elipsoidais estriados de estágio II.
• Nos melanossomos pigmentados de estágio III e IV, a matriz amiloide serve como uma plataforma para concentrar precursores de eumelanina, facilitando a síntese eficiente de melanina enquanto potencialmente sequestra intermediários de reação tóxicos.
• O PMEL é um antígeno específico de melanoma bem caracterizado; peptídeos imunodominantes derivados do PMEL, como G9-154 (KTWGQYWQV) e G9-209 (ITDQVPFSV), são apresentados por moléculas HLA-A e estimulam respostas de células T citotóxicas antitumorais.
• Subcelularmente, o PMEL localiza-se na membrana do retículo endoplasmático, aparelho de Golgi, membrana da rede cis-Golgi, endossomos (corpos multivesiculares) e melanossomos, sendo também encontrado em vesículas extracelulares e formas secretadas.
• A proteína sofre extensas modificações pós-traducionais, incluindo clivagem em pares de resíduos básicos, formação de ligações dissulfeto, glicosilação e adição de ácido siálico.
• Normalmente expresso em baixos níveis em melanócitos adultos quiescentes, o PMEL é superexpresso por melanócitos neonatais proliferantes e durante o crescimento tumoral, particularmente em melanomas e alguns nevos displásicos.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunógeno corresponde à região N-terminal (aa 25-211) do PMEL humano, que é prevista como extracelular/luminal; considere isso ao projetar estratégias de detecção ou ao emparelhar com outros anticorpos.
• Para Western blotting, o PMEL completo não processado migra aproximadamente a 70 kDa, mas note que o PMEL endógeno é processado proteoliticamente em múltiplos fragmentos; valide o padrão de bandas esperado em seus lisados.
• Na imuno-histoquímica (parafina), a marcação do PMEL deve ser membranosa/citoplasmática em melanócitos e células de melanoma; inclua controles positivos (tecido de melanoma) e negativos apropriados.
• Para aplicações de ELISA, use proteína PMEL recombinante ou peptídeos sintéticos como antígenos de revestimento e titule cuidadosamente o anticorpo para obter a melhor relação sinal-ruído.
• Como a expressão de PMEL pode variar com o estado de ativação do melanócito, considere usar linhagens de células de melanoma conhecidas (por exemplo, SK-MEL-28) ou melanócitos primários como controles positivos.

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