Anticorpo Policlonal Anti-PMEL para WB, IF/ICC, ELISA - P40967

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do PMEL

• O PMEL (também conhecido como gp100, Pmel17, SILV, ME20) é uma glicoproteína transmembrana tipo I específica de melanócitos que desempenha um papel central na biogênese do melanossomo. É o precursor das fibrilas amiloides fisiológicas dentro dos melanossomos.
• A proteína sofre processamento proteolítico altamente regulado; seus fragmentos amiloidogênicos se montam em folhas fibrilares paralelas que impulsionam o alongamento dos premelanossomos de estágio I para os melanossomos estriados e elipsoidais de estágio II.
• Nos melanossomos maduros pigmentados de estágio III e IV, a matriz amiloide serve como um arcabouço para a polimerização da eumelanina, concentrando precursores e possivelmente sequestrando intermediários tóxicos.
• A localização subcelular abrange múltiplos compartimentos: é encontrada na membrana do retículo endoplasmático, aparelho de Golgi, membrana da rede cis-Golgi, endossomos (corpos multivesiculares), melanossomos e vesículas extracelulares secretadas.
• O PMEL é reconhecido como um antígeno tumoral específico do melanoma. Entre seus peptídeos próprios não mutados, epítopos restritos a HLA-A2, como G9-154 (KTWGQYWQV), G9-209 (ITDQVPFSV) e G9-280 (YLEPGPVTA), são imunodominantes e podem estimular respostas de células T citotóxicas.
• É normalmente expresso em baixos níveis em melanócitos adultos quiescentes, mas é fortemente superexpresso em melanócitos neonatais proliferantes e durante o crescimento tumoral, particularmente em melanomas malignos. Alguma expressão também é encontrada em nevos displásicos.
• Modificações pós-traducionais incluem glicosilação extensa (carboidratos contendo ácido siálico), formação de ligações dissulfeto e clivagem em pares de resíduos básicos. A proteína madura contém um peptídeo sinal, uma hélice transmembrana e repetições luminais/extracelulares.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunógeno corresponde aos aminoácidos 320–430 dentro do ectodomínio do PMEL humano, uma região provavelmente exposta e adequada para o reconhecimento tanto do comprimento total quanto dos fragmentos processados.
• Para Western blot, confirme a banda esperada de comprimento total em aproximadamente 70 kDa; bandas adicionais mais baixas representando fragmentos amiloidogênicos clivados (por exemplo, Mα, Mβ) podem ser observadas em extratos de células melanocíticas.
• Na imunofluorescência/ICC, a localização no melanossomo pode ser validada usando linhagens celulares de melanoma (por exemplo, SK-MEL-28, Mel-624) ou melanócitos primários; a coloração conjunta com marcadores de melanossomo é aconselhável.
• Aplicações de ELISA devem ser otimizadas usando PMEL recombinante ou lisados celulares; devido à natureza policlonal, este anticorpo pode fornecer alta sensibilidade, mas requer titulação cuidadosa.
• A reatividade cruzada com PMEL de camundongo e rato é declarada; no entanto, recomendamos verificar a reatividade na espécie e contexto tecidual específicos antes de estudos em larga escala.

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