Anticorpo Policlonal de Coelho Anti-PMS2 para WB, IF/ICC, IP, ELISA - P54278

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da PMS2

• PMS2 (homólogo 2 da proteína PMS1) é um componente central do sistema de reparo de incompatibilidades de DNA pós-replicativo (MMR), onde forma um heterodímero com MLH1 para constituir o complexo MutL alfa. Referências relacionadas: PMID:30653781 PMID:35189042
• O recrutamento de MutL alfa à incompatibilidade é mediado por MutS alfa (MSH2-MSH6) ou MutS beta (MSH2-MSH3), e a montagem do complexo ternário com RFC e PCNA ativa a atividade endonuclease latente da PMS2, introduzindo quebras de fita simples próximas à incompatibilidade.
• O mecanismo de discriminação de fita depende da metilação do DNA: a fita recém-sintetizada e não metilada é clivada preferencialmente, garantindo a correção de erros de replicação.
• Como endonuclease, a PMS2 gera pontos de entrada para a exonuclease EXO1, que excisa a fita contendo o erro, e também interage fisicamente com as subunidades do carregador de garra da DNA polimerase III, sugerindo um papel no recrutamento da polimerase replicativa para a síntese de reparo.
• Além do MMR, a PMS2 está implicada na sinalização de danos ao DNA, desencadeando a parada do ciclo celular ou apoptose em resposta a lesões extensivas de DNA, atuando assim como supressor tumoral.
• A PMS2 possui atividade ATPase intrínseca; no entanto, a hidrólise de ATP pode não ser essencial para o reparo proficiente de incompatibilidades sob certas condições. Referências relacionadas: PMID:35189042
• A proteína se localiza exclusivamente no núcleo e é fosforilada em múltiplos sítios. Mutações na PMS2 estão associadas ao câncer colorretal hereditário não poliposoide (síndrome de Lynch) e outras neoplasias.

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• O imunógeno corresponde aos aminoácidos 390–670 da região C-terminal da PMS2 humana, que contém o sítio ativo da endonuclease; considere validar a reatividade em amostras que expressam variantes de PMS2 de comprimento total ou truncadas.
• Para Western blot (WB), espera-se uma banda de aproximadamente 96 kDa; use um controle positivo como lisados de células HeLa ou HEK293, e inclua extratos nucleares para aumentar o sinal.
• Em imunofluorescência (IF/ICC), a PMS2 apresenta um padrão de coloração nuclear; recomenda-se a co-coloração com um marcador nuclear para confirmar a localização.
• Para imunoprecipitação (IP), o anticorpo pode precipitar o complexo MutL alfa (MLH1-PMS2); valide a coprecipitação nas linhagens celulares relevantes.
• A reatividade cruzada com PMS2 de camundongo foi confirmada; para estudos com camundongos, verifique o desempenho no tecido ou tipo celular pretendido.
• Otimize as diluições do anticorpo para cada aplicação e sistema de amostra, pois a reatividade pode variar dependendo dos níveis de expressão e das modificações pós-traducionais.

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