mAb de Coelho anti-POLR2A (N-terminal) para WB, IP, ChIP, ELISA - P24928

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da POLR2A

• POLR2A codifica a maior subunidade catalítica da RNA polimerase II (Pol II), que sintetiza precursores de mRNA e muitos RNAs não codificantes funcionais usando nucleosídeos trifosfato como substratos. Referências relacionadas: PMID:23748380, PMID:27193682, PMID:30190596

• Durante a iniciação da transcrição, a Pol II é recrutada para os promotores do DNA, e a POLR2A forma o centro ativo com a POLR2B, contribuindo com um motivo DxDGD de coordenação de Mg²⁺ essencial para a adição de nucleotídeos. Referências relacionadas: PMID:23748380, PMID:27193682, PMID:28108474, PMID:30190596, PMID:8381534, PMID:9852112

• O domínio C-terminal (CTD) exclusivo é composto por 52 repetições de heptapeptídeos e funciona como uma plataforma para montagem de fatores que regulam a iniciação, alongamento e terminação da transcrição, além do processamento co-transcricional. Referências relacionadas: PMID:24207025, PMID:26124092

• A POLR2A apresenta atividade intrínseca de exonucleásia de prova de leitura 3'→5', permitindo a remoção de nucleotídeos incorretos por meio de retrocesso e clivagem da ligação fosfodiester. Referências relacionadas: PMID:8381534

• A fosforilação do CTD na Ser-5 medeia a fuga do promotor, enquanto a fosforilação da Ser-2 é necessária para a liberação da pausa durante o alongamento; a metilação e acetilação das lisinas do CTD ajustam os níveis de expressão gênica. Referências relacionadas: PMID:24207025, PMID:26124092

• Além da transcrição dependente de DNA, a POLR2A pode funcionar como uma RNA polimerase dependente de RNA, estendendo RNAs não codificantes e replicando o genoma do vírus da hepatite delta durante a infecção. Referências relacionadas: PMID:23748380, PMID:27193682, PMID:30190596

• A proteína se localiza no núcleo, citoplasma e cromossomos, refletindo seus papéis dinâmicos na transcrição e processamento de RNA.

• O splicing alternativo gera múltiplas isoformas, e variantes associadas a doenças na POLR2A foram ligadas a transtornos do neurodesenvolvimento (por exemplo, NEDHIB).

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• O alvo do imunógeno (aa550-650) está localizado na região N-terminal e é conservado entre humano, camundongo e rato, o que suporta a reatividade cruzada observada; recomenda-se o alinhamento de sequência para outras espécies.
• Para Western blot, espera-se uma banda próxima a 217 kDa; utilize um gel de SDS-PAGE de baixa porcentagem (por exemplo, 6%) e otimize as condições de transferência para proteínas de alto peso molecular.
• Na imunoprecipitação de cromatina (ChIP), valide a especificidade do anticorpo com loci genômicos positivos e negativos, e otimize os protocolos de ligação cruzada e clivagem devido ao grande tamanho do complexo Pol II.
• Para imunoprecipitação (IP), condições de lise suaves e a inclusão de tratamento com nuclease podem melhorar a solubilidade da POLR2A ligada à cromatina.
• O anticorpo também é adequado para ELISA; considere o pareamento com um anticorpo de captura para detecção baseada em sanduíche de complexos nativos de Pol II.

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