Anticorpo Policlonais de Coelho Anti-POLR2A para WB, IF/ICC, IP, ELISA - P24928

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do POLR2A

• POLR2A codifica a maior subunidade (RPB1) da RNA polimerase II dirigida por DNA, a enzima responsável pela síntese de precursores de mRNA e muitos RNAs não codificantes em células eucarióticas.
• RPB1 forma o núcleo catalítico da Pol II junto com a segunda maior subunidade RPB2. Ela contém um motivo conservado DxDGD que coordena um íon Mg²⁺ essencial para a adição de nucleotídeos durante a polimerização do RNA. Referências relacionadas: PMID:30190596, PMID:8381534, PMID:9852112
• A enzima passa pelos ciclos de iniciação, alongamento e terminação da transcrição. Durante a iniciação, a Pol II é recrutada para promotores que contêm elementos como a caixa TATA ou ilhas CpG. Referências relacionadas: PMID:23748380, PMID:27193682, PMID:28108474
• RPB1 possui um domínio C-terminal (CTD) único composto por 52 repetições de heptapeptídeos. O CTD sofre fosforilação dinâmica (especialmente em Ser-2 e Ser-5) para coordenar os estágios de transcrição e recrutar fatores de processamento. Referências relacionadas: PMID:24207025, PMID:26124092
• Além da sua atividade de RNA polimerase dependente de DNA, POLR2A pode atuar como RNA polimerase dependente de RNA, estendendo RNAs não codificantes e mediando a replicação do vírus da hepatite delta.
• A proteína se localiza predominantemente no núcleo, mas também é encontrada no citoplasma e associada aos cromossomos durante a mitose.
• Mutações em POLR2A estão associadas a transtornos do neurodesenvolvimento, incluindo deficiência intelectual (NEDHIB), destacando seu papel essencial na expressão gênica.
• O splicing alternativo e as modificações pós-traducionais (acetilação, metilação, ubiquitinação, fosforilação) diversificam ainda mais a função e a regulação do POLR2A.

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• O imunógeno corresponde à região N-terminal (aa 1-260) do POLR2A humano, que se encontra fora do CTD repetitivo. Este design pode conferir especificidade para o núcleo RPB1 em relação ao CTD altamente homólogo encontrado em outras proteínas.
• O anticorpo demonstrou funcionar em WB, IF/ICC, IP e ELISA. Ao realizar WB, observe o peso molecular previsto de ~217 kDa; considere o uso de um gel de SDS-PAGE de baixa porcentagem e uma otimização completa da transferência para uma proteína tão grande.
• A reatividade cruzada com camundongo e rato é confirmada, sugerindo que o epítopo é conservado entre essas espécies. Valide no seu sistema de modelo específico para confirmar.
• Para IF/ICC, é esperada coloração nuclear e perinuclear com base na localização do POLR2A; no entanto, o fundo pode variar dependendo das condições de fixação e permeabilização.
• Em experimentos de IP, certifique-se de que o tampão de lise é compatível com a extração de proteínas nucleares para solubilizar efetivamente os complexos de Pol II.

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