Anticorpo policlonal anti-POLR2D para WB, IF/ICC, IP, ELISA - O15514

Especificações e parâmetros principais do produto

Contexto biológico: função e localização da POLR2D

• A POLR2D, também conhecida como RPB4, RPB16 ou subunidade D da RNA-polimerase II dirigida por DNA, é uma subunidade central da RNA-polimerase II (Pol II), responsável pela síntese de precursores de mRNA e RNAs não codificantes.
• Ela forma um subcomplexo estável com POLR2G/RPB7, que se liga a uma bolsa específica formada pelas subunidades maiores RPB1, RPB2 e RPB6, na base do elemento de grampo da Pol II.
• O subcomplexo POLR2D/RPB4–POLR2G/RPB7 bloqueia o grampo em uma conformação fechada por meio de POLR2G/RPB7, impedindo a entrada de DNA de fita dupla na fenda do sítio ativo e, assim, regulando o início da transcrição.
• Esse subcomplexo também possui atividade de ligação a DNA e RNA de fita simples, contribuindo para a processividade da polimerase e a estabilização dos transcritos.
• A POLR2D está localizada exclusivamente no núcleo, em conformidade com seu papel na transcrição dirigida por DNA.
• De acordo com a UniProt, essa proteína faz parte do proteoma de referência e foi identificada por meio de estudos de identificação proteômica e de estrutura tridimensional.

Orientações experimentais e dicas técnicas

• O imunógeno é uma proteína de fusão recombinante que abrange os aminoácidos 1–142, correspondendo à sequência completa da POLR2D. Esse desenho deve proporcionar alta especificidade para a proteína nativa.
• Considerando a alta identidade de sequência entre as POLR2D humana e de camundongo, espera-se que o anticorpo apresente reação cruzada confiável em amostras de camundongo, conforme sustentado pela validação do fornecedor.
• A detecção por Western blot (WB) deve produzir uma banda proeminente em aproximadamente 16 kDa; use marcadores de peso molecular apropriados para confirmar o tamanho.
• Para imunofluorescência (IF/ICC), espere uma coloração exclusivamente nuclear; faça contracoloração com DAPI para confirmar a colocalização.
• Em experimentos de imunoprecipitação (IP), o anticorpo pode precipitar o subcomplexo POLR2D–POLR2G, possibilitando a análise das interações entre as subunidades da Pol II.

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