Anticorpo Policlonal de Coelho Anti-Proteinase K - P06873

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Antecedentes Biológicos: Função e Localização da Proteinase K

• A Proteinase K é uma serina protease de amplo espectro originalmente isolada do fungo Parengyodontium album (anteriormente Tritirachium album), codificada pelo gene PROK.
• Pertence à família das serina proteases semelhantes à subtilisina e é caracterizada pelo tríade catalítico clássico (Asp-His-Ser) responsável pela hidrólise das ligações peptídicas.
• A enzima cliva preferencialmente ligações peptídicas adjacentes a resíduos de aminoácidos aromáticos e hidrofóbicos, permitindo a degradação eficaz da queratina e outras proteínas recalcitrantes.
• A Proteinase K é sintetizada como uma pré-proteína com um péptido sinal e um pró-péptido, que são removidos proteoliticamente para produzir a enzima madura ativa de aproximadamente 28,9 kDa (forma madura) com um peso molecular total da pré-proteína de cerca de 40,3 kDa.
• A sua estabilidade e atividade são aumentadas pela ligação de cálcio, que protege contra a autólise e a desnaturação térmica; duas ligações dissulfeto estabilizam ainda mais a estrutura terciária.
• Estruturas tridimensionais foram resolvidas (por exemplo, entradas PDB), revelando uma dobra típica de subtilisina com uma fenda profunda de ligação ao substrato.
• Devido à sua robusta atividade proteolítica de amplo espectro, a Proteinase K é amplamente utilizada em biologia molecular para a remoção de proteínas durante a purificação de ácidos nucleicos e em várias aplicações industriais.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunogénio é uma proteína recombinante de Proteinase K, que pode apresentar epítopos nativos e desnaturados; considere isto ao escolher entre condições nativas e desnaturantes para o seu ensaio.
• Para WB, certifique-se de uma preparação adequada da amostra, incluindo tampões de lise apropriados e inibidores de proteases para evitar a degradação do alvo. Utilize um anticorpo secundário anti-coelho adequado e otimize o bloqueio para reduzir o fundo.
• Para ELISA, valide o ensaio com controlos positivos e negativos conhecidos; a reatividade do anticorpo com o antigénio nativo versus o antigénio revestido pode diferir, pelo que deve considerar estratégias de imobilização do antigénio.

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