Anti-PSAP (Prosaposina) Anticorpo Policlonal de Coelho para WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA - P07602

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da PSAP (Prosaposina)

• A prosaposina (PSAP) é uma glicoproteína precursora de 524 aminoácidos que é processada proteoliticamente nos lisossomos para gerar quatro peptídeos de saposina homólogos (saposina A, B, C e D), que servem como proteínas ativadoras não enzimáticas essenciais para as hidrolases de esfingolipídios.
• As saposinas facilitam a degradação de glicoesfingolipídios extraindo substratos lipídicos de bicamadas membranosas e apresentando-os às suas enzimas cognatas; a saposina B ativa a arilssulfatase A, a beta-galactosidase e a alfa-galactosidase A, enquanto a saposina C ativa a glicocerebrosidase e a saposina D ativa a ceramidase ácida.
• Além de seu papel como cofator lisossomal, a prosaposina de comprimento total exibe funções neurotróficas e mieliotróficas através da sinalização pelos receptores acoplados à proteína G GPR37 e GPR37L1, promovendo a sobrevivência neuronal e a mielinização.
• A PSAP é amplamente expressa, com níveis elevados no cérebro, rim e fígado, e localiza-se principalmente ao lúmen lisossomal; também é secretada e detectada em fluidos extracelulares, incluindo o líquido cefalorraquidiano e o leite.
• Mutações na PSAP estão associadas a várias doenças de armazenamento lisossomal, incluindo a doença de Gaucher, a leucodistrofia metacromática e a doença de Krabbe, bem como formas complexas com deficiências combinadas de saposinas; polimorfismos também foram ligados ao risco de doença de Parkinson.
• A proteína contém múltiplas ligações dissulfeto intracadeia e sítios de glicosilação N-ligada que são críticos para sua estabilidade, processamento e ativação funcional. O precursor canônico da prosaposina tem uma massa molecular calculada de 58,1 kDa; a glicosilação extensa frequentemente resulta em bandas de 65–70 kDa em SDS-PAGE.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunógeno corresponde aos resíduos 275–524 da PSAP humana, cobrindo os domínios de saposina C e D e o ligante C-terminal; o anticorpo policlonal resultante deve detectar tanto o precursor de comprimento total quanto possivelmente fragmentos processados de saposina C/D.
• Para Western blot, recomenda-se SDS-PAGE padrão em condições redutoras; uma banda predominante em ~58 kDa é comumente observada em lisados de tecidos humanos, de camundongo e de rato, representando o precursor da prosaposina. Bandas inferiores adicionais podem surgir do processamento proteolítico.
• Ao realizar imunofluorescência, é necessária a permeabilização para acessar a localização lisossomal; a coloração conjunta com um marcador lisossomal (por exemplo, LAMP1) é aconselhada para estudos de colocalização.
• Para imuno-histoquímica em secções embebidas em parafina, a recuperação de antígeno com tampão citrato (pH 6,0) frequentemente melhora o sinal; tecidos de controle positivo incluem cérebro (cerebelo, hipocampo) e rim.
• Este anticorpo pode ser usado em ELISA como reagente de captura ou detecção quando emparelhado com um anticorpo monoclonal anti-PSAP adequado; as diluições ideais e as condições do ensaio devem ser determinadas empiricamente.

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