Anticorpo Policlonal de Coelho Anti-Pumilio 1 para WB, IF/ICC, ELISA - Q14671

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do Pumilio 1

• O homólogo 1 de Pumilio (PUM1) é uma proteína de ligação a RNA específica de sequência que atua como um repressor pós-transcricional ao se ligar ao 3'-UTR de mRNAs alvo através da sequência consenso do Elemento de Resposta Pumilio (PRE) 5'-UGUANAUA-3'. Referências relacionadas: PMID:18328718, PMID:21397187, PMID:21572425

• O PUM1 media a repressão por dois mecanismos: recrutamento direto do complexo desadenilase CCR4-POP2-NOT, levando à inibição da tradução e degradação do mRNA, e promoção da acessibilidade do miRNA para repressão independente de desadenilação. Referências relacionadas: PMID:22955276, PMID:18776931, PMID:20818387, PMID:20860814

• Após estimulação por fator de crescimento, o PUM1 é fosforilado e se liga ao 3'-UTR do mRNA de CDKN1B/p27, induzindo uma mudança conformacional que expõe sítios de ligação de miRNA para miR-221 e miR-222, resultando na supressão eficiente de CDKN1B/p27 e entrada rápida no ciclo celular. Referências relacionadas: PMID:20818387

• O PUM1 reprime um programa de genes essenciais para a estabilidade genômica, incluindo fatores mitóticos, de reparo de DNA e de replicação de DNA; esta atividade é antagonizada pelo lncRNA NORAD, que sequestra o PUM1 no citoplasma. Referências relacionadas: PMID:26724866

• Em neurônios, o PUM1 regula os níveis de mRNA de ATXN1 ligando-se ao seu 3'-UTR e regulando negativamente os transcritos independentemente da maquinaria de miRNA, com implicações para ataxia espinocerebelar. Referências relacionadas: PMID:25768905, PMID:29474920

• O PUM1 localiza-se no citoplasma, corpos-P (P-bodies) e grânulos citoplasmáticos, e é expresso amplamente em tecidos incluindo cérebro, coração, rim, músculo, intestino e estômago, mas está ausente de regiões cerebrais específicas como cerebelo, corpo caloso e hipocampo.

• O PUM1 desempenha papéis na detecção citoplasmática de vírus, espermatogênese e renovação de células-tronco embrionárias, visando mRNAs para regulação pós-transcricional, e está associado a variantes de doença ligadas a epilepsia, deficiência intelectual e neurodegeneração. Referências relacionadas: PMID:25340845

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunógeno corresponde aos aminoácidos 1-130 do Pumilio 1 humano, direcionando a região N-terminal. Esta região pode ser conservada entre espécies, apoiando a reatividade cruzada observada com camundongo.
• Para Western blotting, o peso molecular previsto é ~126 kDa. Use a porcentagem de gel apropriada e condições de transferência para proteínas de alto peso molecular, e considere etapas estendidas de bloqueio e lavagem para reduzir o fundo.
• Na imunofluorescência/ICC, a localização citoplasmática e granular do PUM1 deve ser avaliada com fixação e permeabilização apropriadas; valide o padrão de coloração contra marcadores conhecidos de corpos-P ou grânulos de estresse, se necessário.
• Para aplicações de ELISA, a proteína recombinante imunógena pode servir como controle positivo. Titular o anticorpo para otimizar a relação sinal-ruído.
• Como um anticorpo policlonal, pode ocorrer variabilidade entre lotes; recomendamos validar cada novo lote em seu sistema de ensaio específico.

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