Anticorpo Policlonal Anti-RABGAP1 para WB, IHC-P, ELISA - Q9Y3P9

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da RABGAP1

• A RABGAP1, também conhecida como proteína ativadora de GTPase Rab 1, GAPCenA (proteína associada a GAP e centrossomo) ou TBC1D11, atua como uma proteína ativadora de GTPase (GAP) para a RAB6A, promovendo a hidrólise de GTP para regular o tráfego e a sinalização mediados por Rab.
• Desempenha um papel na nucleação de microtúbulos no centrossomo e está implicada na transição metáfase-anáfase durante a divisão celular, conectando o tráfego de membranas com o controle do ciclo celular.
• A RABGAP1 contém um domínio TBC (Tre-2/Bub2/Cdc16) característico das RabGAPs, juntamente com regiões de enrolamento em hélice (coiled-coil) que podem facilitar interações proteína-proteína e o direcionamento para o centrossomo.
• A localização é predominantemente citoplasmática, com enriquecimento no centrossomo e no citosol, conforme indicado por estudos de fracionamento subcelular e imunofluorescência.
• A proteína sofre processamento alternativo (splicing), produzindo múltiplas isoformas, e é regulada por fosforilação, conforme evidenciado por dados de proteômica e pela presença de sítios de fosforilação em bancos de dados.
• O peso molecular é de aproximadamente 122 kDa (calculado ~121,7 kDa); o anticorpo reconhece uma banda próxima a esse tamanho em Western blot de lisados apropriados.
• A RABGAP1 foi identificada em triagens proteômicas de alto rendimento, confirmando sua expressão em tecidos humanos e sua associação com o proteoma do centrossomo.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunógeno foi desenhado contra uma região C-terminal (aa 830-1069) da RABGAP1 humana, que abrange parte do domínio de enrolamento em hélice e pode incluir regiões críticas para a atividade GAP; assim, o anticorpo pode reconhecer epítopos funcionais.
• Para Western blot, use condições redutoras padrão e carregue 20–50 µg de lisado celular total; a banda prevista está em 122 kDa, e a reatividade cruzada com camundongo permite a análise em linhagens celulares comuns, como NIH/3T3 ou MEFs.
• Na imuno-histoquímica (IHC-P), a recuperação antigênica usando tampão citrato ou EDTA é recomendada; otimize a diluição do anticorpo (por exemplo, 1:50–1:200) e inclua controles negativos apropriados para confirmar a especificidade.
• Para ELISA, o anticorpo pode ser usado como reagente de captura ou detecção; titulações preliminares em "tabuleiro de xadrez" são aconselhadas para determinar as concentrações ideais de revestimento e anticorpo.
• Como a RABGAP1 é uma proteína de baixa abundância envolvida na regulação do ciclo celular, considere sincronizar células para enriquecer células em metáfase se estiver avaliando a localização centrossomal ou mudanças de expressão dependentes do ciclo celular.

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