Anticorpo Policlonal Anti-Rad50 para WB, IHC-P, ELISA - Q92878

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do Rad50

• O RAD50 é um componente do complexo MRN (juntamente com MRE11 e NBN), que desempenha um papel central no reparo de quebras de fita dupla (DSB), recombinação de DNA e manutenção da integridade dos telômeros (PubMed:15064416, PubMed:21757780, PubMed:27889449). Referências relacionadas: PMID:15064416 PMID:21757780 PMID:27889449
• O complexo MRN é essencial para o reparo de quebras de fita dupla do DNA via recombinação homóloga (HR), um mecanismo livre de erros que ocorre principalmente durante as fases S e G2 (PubMed:15064416, PubMed:21757780). Referências relacionadas: PMID:15064416 PMID:21757780
• O RAD50 contribui para o processamento das extremidades do DNA ligando-se às extremidades e regulando as atividades de exonuclease/endonuclease do MRE11; a ligação de ATP induz uma mudança conformacional que controla a acessibilidade da nuclease MRE11 (PubMed:11741547, PubMed:12805565, PubMed:28134932). Referências relacionadas: PMID:11741547 PMID:12805565 PMID:28134932
• O complexo MRN também medeia a sinalização de dano ao DNA ativando as quinases ATM e ATR, uma função independente da atividade de nuclease do MRE11 (PubMed:15064416, PubMed:15790808, PubMed:16622404). Referências relacionadas: PMID:15064416 PMID:15790808 PMID:16622404
• O RAD50 localiza-se no núcleo e é encontrado nos telômeros dos cromossomos, onde pode modular a formação de t-loops (PubMed:10888888). Referências relacionadas: PMID:10888888
• A expressão de RAD50 é muito baixa na maioria dos tecidos, com níveis mais altos observados em testículos e fibroblastos.
• O RAD50 está sujeito a modificações pós-traducionais, incluindo acetilação e fosforilação, e apresenta domínios de ligação a ATP, hélice superenrolada (coiled-coil) e ligação a zinco (palavras-chave do UniProt).
• O complexo MRN também processa R-loops, contribuindo para a estabilidade genômica (PubMed:31537797). Referências relacionadas: PMID:31537797

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunógeno corresponde à região N-terminal (aa 1-270) do RAD50 humano; portanto, espera-se que o anticorpo reconheça o terminal N da proteína.
• Para western blot (WB), o RAD50 migra em ~154 kDa; garanta condições adequadas de separação por SDS-PAGE e transferência (por exemplo, tempos de transferência estendidos) para proteínas de alto peso molecular.
• Para imuno-histoquímica (IHC-P), valide a coloração em amostras de testículo humano ou fibroblastos, que exibem maior expressão de RAD50; considere a otimização da recuperação de antígeno.
• Para ELISA, o peptídeo sintético imunógeno pode servir como controle positivo para confirmar a reatividade do anticorpo; o desempenho na proteína endógena de comprimento total deve ser validado de forma independente.
• Dado o papel central do RAD50 no reparo de DNA e biologia dos telômeros, este anticorpo pode auxiliar em ensaios de imunoprecipitação de cromatina (ChIP) ou ensaios de focos de dano ao DNA, embora tais aplicações não tenham sido validadas com este produto e exijam otimização pelo usuário.

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