Anticorpo Policlonal de Coelho Anti-Rad50 para WB, IHC-P, IP, ELISA - Q92878

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da RAD50

• A RAD50 é um componente central do complexo MRN (MRE11-RAD50-NBS1) e desempenha um papel fundamental no reparo de quebras de fita dupla de DNA, recombinação homóloga, integridade dos telômeros e meiose.
  Referências relacionadas: PMID:15064416, PMID:21757780, PMID:27889449
• O complexo MRN media a ressecção das extremidades do DNA, gerando DNA de fita simples crítico para a recombinação homóloga, e facilita o recrutamento de fatores de reparo e a ativação das quinases ATM/ATR após danos no DNA.
  Referências relacionadas: PMID:15064416, PMID:27889449, PMID:28867292, PMID:15790808, PMID:16622404
• O complexo possui atividades de endonuclease de fita simples e exonuclease 3′-5′ de fita dupla (fornecidas pela MRE11), enquanto a RAD50 liga e prende as extremidades do DNA para regular a atividade da MRE11.
  Referências relacionadas: PMID:11741547, PMID:9590181, PMID:9651580, PMID:12805565, PMID:28134932
• A RAD50 contém domínios de ligação a ATP; a ligação do ATP induz uma conformação fechada que posiciona de forma ideal as extremidades do DNA dentro do sítio ativo da MRE11 (por similaridade).
• A RAD50 é predominantemente nuclear, localizando-se nos telômeros dos cromossomos e em locais de dano no DNA; também participa no processamento de R-loops e na modulação da formação de t-loops.
  Referências relacionadas: PMID:10888888, PMID:31537797
• A RAD50 é expressa em baixos níveis na maioria dos tecidos, com expressão elevada em testículos e fibroblastos.
• A RAD50 está sujeita a acetilação e fosforilação, e é caracterizada por motivos de ligação a ATP, coiled-coil, ligação a zinco e hidrolase.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• Para análise de Western blot, espere uma banda próxima a 154 kDa. Use um lisado de controle positivo apropriado de células humanas, de camundongo ou de rato e inclua um controle de carga.
• Para IHC-P em seções embebidas em parafina, métodos padrão de recuperação antigênica (por exemplo, recuperação de epítopo induzida por calor) podem ser considerados; experimentos piloto são recomendados.
• Para imunoprecipitação (IP), use protocolos padrão com etapas de pré-limpeza; o anticorpo é adequado para precipitar complexos endógenos de RAD50 a partir de extratos nucleares.
• Para ELISA, o imunógeno peptídico (resíduos N-terminais 1-100) pode ser usado para validar o título do anticorpo; a reatividade cruzada com proteínas intimamente relacionadas deve ser descartada por alinhamento de sequência.
• Devido à sua reatividade entre espécies, este anticorpo pode ser empregado em estudos comparativos em modelos humanos, de camundongo e de rato de reparo de DNA.

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