Anticorpo policlonal de coelho anti-Raf1 para WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA - P04049

Especificações e parâmetros principais do produto

Contexto biológico: função e localização de Raf1

• RAF1 (também conhecido como c-Raf ou Raf-1) é uma serina/treonina-proteína quinase que atua como uma ligação fundamental entre as GTPases Ras associadas à membrana e a cascata MAPK/ERK, regulando a proliferação celular, a diferenciação, a apoptose e a sobrevivência.
• A ativação de RAF1 inicia uma cascata de fosforilação por meio de MEK1/2 e ERK1/2, controlando, em última análise, a transcrição de genes envolvidos na progressão do ciclo celular e na transformação celular.
• RAF1 fosforila múltiplos alvos a jusante, incluindo BAD (em Ser-75), adenilil ciclases (ADCY2, ADCY5, ADCY6) e PPP1R12A e TNNT2, além de modular a sinalização de NF-kB, a motilidade, a apoptose, a proliferação e a angiogênese.
• Localização subcelular: RAF1 é encontrado no citoplasma, na membrana celular, na mitocôndria e no núcleo, com translocação para a mitocôndria mediando efeitos antiapoptóticos por meio da ligação a BCL2.
• Especificidade tecidual: No músculo esquelético, a isoforma 1 é mais abundante do que a isoforma 2.
• Modificações pós-traducionais: RAF1 sofre fosforilação nos resíduos Ser-338 e Ser-339 pela PAK1 e está sujeito a metilação, ligação a metais (zinco) e splicing alternativo, dando origem a múltiplas isoformas.
• Associação com doenças: Mutações e desregulação de RAF1 estão associadas a cardiomiopatias (CMD1NN) e surdez, destacando seu papel em diversos processos fisiológicos.
• Principais funções biológicas: Atua como um proto-oncogene, regulando a cicatrização de feridas, a transformação de células epiteliais e a supressão da apoptose.

Orientações experimentais e dicas técnicas

• Na análise por Western blot, o anticorpo detecta uma banda em aproximadamente 73 kDa. Recomenda-se o uso de controles positivos, como lisados de células HeLa, HEK293 ou Jurkat.
• Na imuno-histoquímica, pode ser necessária a recuperação antigênica; considere testar métodos induzidos por calor e enzimáticos em tecidos incluídos em parafina.
• Para imunofluorescência, inclua a permeabilização com Triton X-100 e utilize anticorpos secundários apropriados; observe que Raf1 se localiza no citoplasma, na membrana e no núcleo.
• O imunógeno abrange os aminoácidos 190-350, podendo reconhecer múltiplas isoformas de Raf1; recomenda-se a validação nas espécies relevantes (humana, camundongo e rato).
• Por se tratar de um anticorpo policlonal, pode ocorrer variabilidade entre lotes; verifique o desempenho no ensaio pretendido utilizando controles apropriados.

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