Anticorpo Policlonico de Coelho Anti-RAG1 para WB, ELISA - P15918

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do RAG1

• RAG1 (proteína 1 ativadora da recombinação, também conhecida como RAG-1 e RNF74) é o componente catalítico do complexo RAG, essencial para a recombinação V(D)J que monta os diversos genes de imunoglobulinas e receptores de células T em linfócitos em desenvolvimento.
• Ele se liga diretamente às sequências conservadas de sinal de recombinação (RSS) e catalisa quebras duplas de DNA específicas do sítio por meio de um mecanismo de duas etapas: clivagem inicial a montante do heptâmero, seguida pela formação de hairpin via transesterificação, criando extremidades de sinal romas e extremidades de codificação em hairpin. A RAG2 é necessária para todas as atividades catalíticas.
• Além da atividade de endonuclease, a RAG1 funciona como uma ubiquitina-proteína ligase E3 que monoubiquitina a histona H3 em sítios desconhecidos, uma modificação necessária para a etapa de junção da recombinação V(D)J. Além disso, a trimetilação de H3 em Lys-4 (H3K4me3) estimula ambas as etapas de clivagem.
• RAG1 se localiza no núcleo, onde interage com a cromatina para mediar os eventos de recombinação.
• Sua expressão é restrita a células linfoides em maturação, consistente com seu papel no desenvolvimento de linfócitos.
• RAG1 também participa da exclusão alélica em células pré-B, induzindo o reposicionamento dependente de ATM de um alelo de imunoglobulina para a heterocromatina pericentromérica, impedindo a recombinação do segundo alelo e garantindo a clonalidade.
• A proteína sofre splicing alternativo, e sua natureza multifuncional é destacada por palavras-chave como ligação a DNA, endonuclease, hidrolase, ligação a metais (dedo de zinco), transferase, conjugação de ubl e variantes patogênicas ligadas à imunodeficiência combinada grave (SCID).

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• O imunógeno abrange a região N-terminal (aminoácidos 1-270) do RAG1 humano, que inclui o domínio de ligação ao DNA. Esta região pode detectar múltiplas isoformas oriundas do splicing alternativo.
• Para Western blotting, o peso molecular previsto é de ~119 kDa. Considere usar um gel de SDS-PAGE de 6 a 8% e tempos de transferência estendidos para proteínas de alto peso molecular.
• Protocolos de ELISA podem usar revestimento com proteína recombinante RAG1 ou peptídeo; valide as condições do ensaio na sua matriz de amostra para garantir a especificidade.
• A reatividade cruzada com camundongo é esperada; valide o desempenho em tecidos linfoides ou linhas celulares de camundongo se for usado nesses sistemas.
• Extratos proteicos de linhas celulares linfoides humanas ou de camundongo (ex: Jurkat, Raji, EL4) são provavelmente controles positivos adequados; linhas celulares não linfoides podem servir como controle negativo.

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