Anticorpo policlonal de coelho anti-RANKL para WB, IF/ICC, ELISA - O14788

Especificações e parâmetros principais do produto

Contexto biológico: função e localização do RANKL (TNFSF11)

• RANKL (ligante do ativador do receptor do fator nuclear kappa-B), também denominado TNFSF11, ODF, OPGL e TRANCE, é uma proteína transmembrana do tipo II pertencente à superfamília de ligantes do fator de necrose tumoral (TNF).
• Como citocina, é um regulador principal da diferenciação e ativação dos osteoclastos ao se ligar ao seu receptor RANK (TNFRSF11A) e ao receptor chamariz OPG (TNFRSF11B), controlando assim a remodelação óssea.
• O RANKL aumenta a capacidade das células dendríticas de estimular a proliferação de células T virgens e está envolvido na regulação das interações entre células T e células dendríticas, sugerindo um papel na imunidade adaptativa.
• Promove a reabsorção óssea patológica na hipercalcemia humoral da malignidade, destacando sua importância na doença óssea associada ao câncer. Referências relacionadas: PMID:22664871
• O RANKL desencadeia a osteoclastogênese por meio de cascatas de sinalização que geram oscilações sustentadas de Ca2+ intracelular, levando à ativação e translocação nuclear de NFATC1 e à indução da transcrição de genes específicos dos osteoclastos.
• A proteína está localizada na membrana celular e no citoplasma, podendo ser secretada na forma solúvel (sRANKL) por meio de splicing alternativo ou clivagem proteolítica.
• A maior expressão é encontrada nos linfonodos periféricos, com níveis moderados a baixos no baço, leucócitos do sangue periférico, medula óssea, coração, placenta, músculo esquelético, estômago e tireoide.
• As modificações pós-traducionais incluem glicosilação ligada a N, e a molécula existe em isoformas ancoradas à membrana e solúveis, reguladas por splicing alternativo e liberação proteolítica.

Orientações experimentais e dicas técnicas

• O imunógeno abrange os aminoácidos 78–317 do RANKL humano, incluindo o domínio de homologia extracelular do TNF; portanto, espera-se que este anticorpo detecte tanto as formas ligadas à membrana quanto as formas solúveis (sRANKL).
• Para Western blotting, considere o uso de lisados de tecidos com alta expressão de RANKL, como linfonodos ou células T ativadas, e valide em condições redutoras para observar a banda de aproximadamente 35 kDa.
• Na imunofluorescência/imuno-histoquímica, pode ser necessária uma permeabilização adequada para a detecção citoplasmática; estudos de colocalização com marcadores de membrana podem ajudar a confirmar a distribuição subcelular.
• Para ELISA, este anticorpo pode ser adequado como reagente de captura ou detecção para quantificar sRANKL em sobrenadantes de culturas celulares ou fluidos biológicos; sempre faça uma validação cruzada com uma curva padrão caracterizada na sua matriz específica.
• Foi observada reatividade cruzada com camundongo e rato; no entanto, as diluições de trabalho ideais e a validação específica para cada espécie devem ser determinadas empiricamente no sistema de amostra relevante.

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