Anticorpo Policlonico de Coelho Anti-RASSF1 para WB e ELISA - Q9NS23

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da RASSF1

• A RASSF1 é um supressor tumoral potencial necessário para a apoptose dependente de receptor de morte. Ela medeia a ativação de STK3/MST2 e STK4/MST1 durante a apoptose induzida por Fas, evitando sua desfosforilação.
• Após associação com MOAP1, a RASSF1 promove a mudança conformacional de BAX e sua translocação para as membranas mitocondriais em resposta à estimulação por TNF e TNFSF10.
• A isoforma A interage com CDC20, um ativador do complexo promotor da anáfase (APC), inibindo a atividade da APC e a progressão mitótica. Ela também inibe a proliferação regulando o acúmulo de ciclina D1 na transição da fase G1/S.
• A isoforma A interrompe a interação MDM2-DAXX-USP7, promovendo a auto-ubiquitinação de MDM2 e contribuindo para a ativação eficiente de TP53 no controle do ponto de verificação do ciclo celular após danos no DNA.
• A proteína se localiza no citoplasma, citoesqueleto (incluindo microtúbulos, centrossomo, fuso mitótico e polo do fuso) e núcleo.
• As isoformas A e C são expressas ubiquitariamente em todos os tecidos testados, mas a isoforma A está frequentemente ausente em linhas de células cancerosas. A isoforma B é expressa principalmente em células hematopoiéticas.
• As principais modificações pós-traducionais incluem acetilação, metilação e fosforilação. A proteína contém um domínio de dedo de zinco e se liga ao zinco.
• O splicing alternativo e o uso de promotores alternativos geram múltiplas isoformas, e o gene está sujeito a silenciamento epigenético em muitos tipos de câncer.

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• O imunógeno corresponde aos aminoácidos 101–340 da RASSF1 humana (isoforma A), englobando domínios funcionais críticos. Recomenda-se verificar a especificidade da isoforma usando controles positivos que expressam variantes conhecidas de RASSF1.
• Para análise por Western blot, lisados de células totais de tecidos/linhagens celulares humanas ou de camundongo que expressam RASSF1 devem gerar uma banda próxima de 39 kDa. É importante notar que modificações pós-traducionais podem causar pequenas alterações na mobilidade eletroforética.
• Em ELISA, o uso da proteína recombinante ou peptídeo derivado da região do imunógeno como antígeno de revestimento pode ajudar a confirmar o reconhecimento pelo anticorpo. Valide as condições do ensaio com controles positivos e negativos apropriados.
• Dado que a RASSF1 é frequentemente silenciada por metilação do promotor em câncer, o tratamento com agentes desmetilantes (por exemplo, 5-aza-2'-desoxicitidina) antes da preparação do lisado pode ser necessário para detecção em certas linhagens celulares.
• Este anticorpo demonstrou reagir com amostras humanas e de camundongo; a reatividade cruzada com outras espécies deve ser determinada empiricamente.

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