Anticorpo policlonal anti-RB para WB, IF/ICC, ELISA - P06400

Especificações e parâmetros principais do produto

Contexto biológico: função e localização do RB

• RB (proteína associada ao retinoblastoma) é um supressor tumoral e regulador fundamental da transição do ciclo celular de G1/S. A forma hipofosforilada liga-se aos fatores de transcrição E2F, reprimindo a transcrição de genes necessários para a entrada na fase S. A fosforilação dependente de ciclina/CDK libera os E2Fs, desencadeando a progressão do ciclo celular (PubMed:10499802). O RB também promove a transição de G0-G1 por meio da fosforilação por CDK3/ciclina-C (PubMed:15084261).

  Referências relacionadas: PMID:10499802 PMID:15084261

• Está diretamente envolvido na formação da heterocromatina, estabilizando a metilação de histonas e recrutando as metiltransferases de histonas SUV39H1, KMT5B e KMT5C. Controla a trimetilação da lisina-20 da histona H4, levando à repressão transcricional epigenética.

• Medía a repressão transcricional por SMARCA4/BRG1 mediante o recrutamento de um complexo de desacetilase de histonas (HDAC) para o promotor de c-FOS. Em neurônios em repouso, um complexo repressor fosfo-RB1-HDAC1 inibe a transcrição de c-FOS; o influxo de cálcio desfosforila o RB1 por meio da calcineurina, liberando a repressão.

• A localização subcelular inclui o núcleo e o citoplasma.

• É expresso na retina e nos queratinócitos do prepúcio (em nível proteico) (PubMed:20940255).

  Referências relacionadas: PMID:20940255

• Está sujeito a modificações pós-traducionais importantes: acetilação, metilação e fosforilação extensa, que regulam sua atividade e suas interações.

• Durante a infecção viral, o antígeno T grande do SV40, a proteína E7 do HPV ou a proteína E1A do adenovírus ligam-se ao RB1, interrompendo o complexo RB1-E2F1 e anulando sua função de supressor tumoral.

Orientações experimentais e dicas técnicas

• O imunógeno corresponde à região C-terminal (aa 701-928), que é bem conservada e provavelmente gerará reatividade contra o RB de comprimento total (~106 kDa).
• Para Western blot, utilize um marcador de proteínas de faixa intermediária para resolver claramente a banda de 106 kDa. Recomenda-se o uso de extratos nucleares para a detecção ideal do RB endógeno. Valide o anticorpo em linhagens celulares humanas relevantes (por exemplo, aquelas com status de RB conhecido) e considere um controle com peptídeo bloqueador caso seja observado background.
• Em IF/ICC, otimize as condições de fixação e permeabilização; a fixação com metanol pode preservar melhor os epítopos nucleares do RB. Para ELISA, o imunógeno recombinante pode ser utilizado como controle positivo.
• Por ser um anticorpo policlonal produzido em coelho, a consistência entre lotes pode variar. Inclua controles apropriados e valide cada novo lote.

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