Anticorpo Monoclonal de Coelho Anti-REST/NRSF para WB, IP, ELISA - Q13127

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do REST/NRSF

• REST/NRSF é um repressor transcricional de dedo de zinco que se liga ao elemento silenciador restritivo a neurônios (NRSE) e silencia a expressão gênica neuronal em células não neuronais. Referências relacionadas: PMID:11741002 PMID:11779185 PMID:12399542
• Ele recruta corepressores SIN3A e RCOR1, que por sua vez recrutam histonas desacetilases, e também media repressão via o complexo BHC através de desacetilação e desmetilação de histonas, levando à compactação da cromatina. Referências relacionadas: PMID:10449787 PMID:10734093
• REST também pode reprimir a transcrição recrutando CDYL e a histona metiltransferase EHMT2, um processo potencialmente importante para a supressão da transformação celular. Referências relacionadas: PMID:19061646
• Em células-tronco neurais, o REST mantém a repressão de genes neuronais, preservando a quiescência e prevenindo a diferenciação prematura. Referências relacionadas: PMID:21258371
• Sob condições hipóxicas, o REST atua como um repressor chave ao se ligar diretamente a sítios NRSE nos promotores de genes alvo; ele também media resistência ao estresse no cérebro envelhecido e contribui para a morte celular neuronal induzida por isquemia, parcialmente através da repressão do miR-132. Referências relacionadas: PMID:27531581 PMID:24670762
• O splicing alternativo produz isoformas, incluindo uma isoforma curta que pode heterodimerizar com o REST de comprimento total e inibir sua atividade repressora; o splicing dependente de SRRM4 gera uma isoforma REST essencial para a audição. Referências relacionadas: PMID:11741002 PMID:11779185
• REST é predominantemente nuclear, mas também pode ser detectado no citoplasma; é uma fosfoproteína, sujeita à ubiquitinação, e contém múltiplos domínios de dedo de zinco.
• É expresso ubiquamente, com níveis mais altos em tecidos linfoides; no cérebro, o REST é expresso em populações neuronais específicas e seu esgotamento nuclear está ligado à doença de Alzheimer, doença de Parkinson e demência com corpos de Lewy, onde pode se acumular em corpos de Lewy. Referências relacionadas: PMID:8568247 PMID:24670762 PMID:30684677 PMID:26053433

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunógeno é um peptídeo sintético dos aminoácidos 100–200 do REST/NRSF humano; esta região pode estar presente em múltiplas isoformas. Considere o alinhamento de sequências para avaliar o reconhecimento potencial de isoformas.
• Para western blotting (WB), espere uma banda em torno de 122 kDa, consistente com o peso molecular previsto. Modificações pós-traducionais (por exemplo, fosforilação, ubiquitinação) podem causar ligeiros desvios de migração ou bandas adicionais.
• REST é uma proteína nuclear; protocolos eficientes de extração nuclear ou lisados celulares totais incluindo frações nucleares podem melhorar a detecção em WB e IP.
• Para imunoprecipitação (IP), o formato monoclonal de coelho normalmente oferece alta especificidade e baixo ruído de fundo; inclua um controle de isotipo apropriado.
• No ELISA, use um ensaio de bloqueio por peptídeo para verificar a ligação específica; o peptídeo imunogênico pode servir como controle positivo.
• O anticorpo mostra reatividade cruzada com REST de rato e rato; valide as condições do ensaio na espécie pretendida, pois a conservação do epítopo pode influenciar o desempenho.

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