Anticorpo Monoclonal de Coelho Anti-Rev-Erbα/NR1D1 para WB, IF/ICC, IF-P, ELISA - P20393

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização de Rev-Erbα/NR1D1

• Rev-Erbα (NR1D1) é um receptor nuclear ligante de heme que atua como repressor transcricional, formando um ramo negativo crítico do relógio circadiano ao reprimir diretamente genes centrais do relógio, incluindo BMAL1, CLOCK e CRY1.
• Regula diversas vias metabólicas, incluindo metabolismo de lipídios e ácidos biliares, adipogênese, gliconeogênese e respostas inflamatórias, de forma dependente de heme ao recrutar o complexo corepressor NCOR1/HDAC3.
• A proteína se liga ao DNA como monômero nos elementos RevRE (consenso 5'-[A/G]GGTCA-3' com uma sequência 5' rica em A/T) ou como homodímero nos elementos RevDR-2 (repetições diretas espaçadas por dois nucleotídeos).
• Rev-Erbα compete com RORα pela ligação ao DNA e reprime PPARGC1A, controlando assim a síntese de heme e a expressão rítmica de enzimas metabólicas.
• Subcelularmente, NR1D1 está principalmente no núcleo, mas também se localiza no citoplasma e é encontrado em espinhas dendríticas, o que é consistente com seu papel nas funções neuronais.
• É amplamente expresso com níveis elevados no fígado, tecido adiposo, músculo esquelético, cérebro e macrófagos; sua expressão oscila diariamente no núcleo supraquiasmático e nos tecidos periféricos.
• As principais modificações pós-traducionais incluem fosforilação, acetilação e ubiquitinação, que modulam sua estabilidade e atividade; a degradação mediada por ubiquitina alivia a repressão inflamatória após estímulos.

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• O imunógeno corresponde aos aminoácidos 280–360 dentro do domínio de ligação ao ligante; esta região pode conferir especificidade para a conformação do receptor e as interações dependentes de heme.
• Para Western blotting, o peso molecular previsto é de 67 kDa; verifique o tamanho da banda nas amostras relevantes, pois a expressão endógena pode variar de acordo com o horário circadiano e o tipo de tecido.
• Na imunofluorescência/imunocitoquímica (IF/ICC), espere uma coloração predominantemente nuclear; no entanto, a localização citoplasmática e dendrítica pode ser observada em células neuronais, portanto as condições adequadas de fixação e permeabilização devem ser otimizadas.
• Para aplicações de ELISA, considere emparelhar com um sistema de detecção que reconheça a região Fc da IgG de coelho se estiver usando este anticorpo primário em formato indireto.
• Ao trabalhar com Rev-Erbα, observe que sua expressão e atividade são reguladas ritmicamente; colete as amostras em pontos de tempo circadianos consistentes para garantir a reprodutibilidade.
• O anticorpo tem reatividade cruzada com camundongo e rato, portanto pode ser usado para estudos comparativos entre espécies; valide na espécie desejada por meio de controles adequados.

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